Reagentsprovidedinthekit
Thematerialslistedaresufficientfor20tests.Thenumberoftestsisbasedontheuseof200μLeachofready‐to‐usereagentperslide.
PositiveControlSlides
•Onehumanrenalcarcinomaslides
BlockingBuffer
•10XNon-specificblockingbuffer
•Diluteat1:10usingdistilledwaterpriortostaining;unusedworkingsolutionmaybestoredat4°Cfor3month.
EquilibriumBuffer
•EquilibriumBuffer
•Ready‐to‐usereagent
Rabbitanti-humanCD31antibody
•Rabbitanti-CD31antibody
•DiluteinAntibodyDiluentsimmediatelybeforeuse(recommenduseat1:50dilution).
AntibodyDiluent
•AntibodyDilutent
•Ready‐to‐usereagent
WashBuffer
•TrisbufferedsalinewithTween20(pH7.6)
•Diluteat1:20usingdistilledwaterpriortostaining;unusedworkingsolutionmaybestoredat4°Cfor3month.
RabbitHRPPolymer
•RabbitHRPPolymer
•Ready‐to‐usereagent
DABsubstratebuffer
•10XDABsubstratebuffer
HydrogenPeroxide(H2O2)forDABsubstratebuffer
•0.3%HydrogenPeroxidesolution
DABChromogen
•Diaminobenzedinetetrahydrochloride(DAB)substratesolution(DonotexposeDABcomponentstodirectorbrightlightduringstorageandstainingprocess).
Materialsrequiredbutnotincludedinthekit
Reagents:
•Xylene
•Ethanol
•EndogenousPeroxidaseBlockingSolution(3%HydrogenPeroxide)
•Hematoxylin
•Mountingmedia
•Distilledordeionizedwater
•AntigenRetrievalBuffer(10X)0.1MCitrateBuffer(pH6.0)
LabEquipment:
•Steamerormicrowaveoven(forantigenretrieval)
•PAPpenforrestrainingreagentsonslides
•Moistchamberforslidesincubationwithstainingreagents
•Generallabequipmentforimmunohistostainingsuchasslideracks,stainingjars,coverslips,timer,Pipettes,etc.Microscopeequipmentandaccessories
StorageandstABIlity
StoreCD31IHCKitsat2‐8°C.Thekitisstableforsixmonthsat4°C.Donotuseafterexpirationdate.
Precautions
Takereasonableprecautionswhenhandlingreagents.UsedisposablegloveswhenhandlingsUSPectedcarcinogensortoxicmaterials(examples:DAB,xyleneandH2O2).Unusedsolutionshouldbedisposedaccordingtoapplicablelocal,stateandfederalregulations.
TheCD31ImmunohistostainingKithasbeendesignedforthestainingoftissuesthathavebeenfixed(usuallyinneutralbufferedformalin)andsubsequentlyembeddedinparaffinbeforesectioning.Thisprotocolisrecommendedasastartingpointandoptimizationbytheindividualend‐usermayberequired.
Note:
•Donotallowspecimenstodryduringthestainingprocedure.Specimendryingmaycauseincreasednon‐specificstainingandbackground.
•Sometissuemayneedtobaketoremoveover‐coveredparaffinpriortotheprocedure.Ifneeded,bakeat55‐60°Cfor30minutes.
I.Deparaffinizationandrehydration
Priortostaining,tissuesectionsmustbedeparaffinizedandrehydrated.Incompleteremovalofparaffincancausepoorstainingofthesection.Usepositivecontrolslideprovidedinthekitforqualitycontrolandtrouble-shootingpurpose.
1.Immerseslidesinxyleneandincubatefor5minutes.Repeattwicewithfreshxyleneforanother5minuteseach.
2.Immerseslidesin100%ethanolfor5minutes,andfollowwithimmersionin95%,75%and50%ethanolfor3minuteseach.
3.Rinseslideswithdistilledwaterfor5minutes;keepinwateruntilreadytoperformantigenretrieval.
II.Heatinducedantigenretrieval(HIAR)
Mostformalin‐fixedtissuerequiresanantigenretrievalstepbeforeimmunohistochemicalstainingcanproceed.Heatinducedantigenretrievalcanbeperformedusingasteamer,pressurecooker,oramicrowaveoven.The
retrievaltimewritteninthisprotocolisbasedonusingasteamer.Theheatingtimemayneedtobeadjustedifyouuseadifferentdeviceandmethod.
1.Fillplasticcoplinjar/containerwithAntigenRetrievalBuffer(0.01MCitrateBuffer,pH6.0,notincludedinthekits).
PrepareStockSolution:
0.1MSodiumCitrate20.5mL
0.1MCitricAcid4.5mL
Adddistilledwaterto250mL
2.Placethecoplinjar/containerinsteamerwithlid.
3.Turnonsteamerandpreheatto90‐100°C.Carefullyputslidesintothecoplinjar/containerandsteamfor40min(95‐100°C).
4.Turnoffthesteamer,removethecoplinjar,placeatroomtemperatureandallowslidestocoolfor20min.Keepthejarcoveredallthetime.
5.Rinseslidebyincubationofslideindistilledwaterfor3minutes.Repeatthissteptwiceandbeginstainingprocedure.
III.Stainingprocedure
BlockingofEndogenousPeroxidase
Note:PeroxidaseBlockingisoptional.Ifnonon-specificstainingisobserved,skipthesestepsandgotostep3.
1.Tapoffexcesswater.DrawacirclearoundthespecimenontheslidewithPAPpen(notincludedinthekit.Alternatively,foldedKimwipescouldbeusedtobrieflyblotthewateraroundthespecimen.Repeatthisblotstepeachtimebeforeaddreagentonslide).Apply200μlormoreofPeroxidaseBlockingSolution(notincludedinthekit)sufficienttocoverspecimen,andincubatefor5minutes.
2.Rinseslidebyincubationofslideindistilledwaterfor3minutes.Repeatthissteptwice.
3.RinseslidebyincubationslideinPBSfor3minutes.
BlockingofNon-specificbinding
4.TapoffexcessPBS.(IfthePeroxidaseBlockingstepisskipped,drawacirclearoundthespecimenontheslidewithPAPpenorusingtheedgeoffoldedKimwipestoquicklyblotthewateraroundthespecimen).Apply200μl1XBlockingBufferimmediatelytocoverspecimenandincubateinamoistchamberfornomorethan10minutes
Note:10Xblockingbuffermayformprecipitatesat4°C.Completelydissolvetheprecipitatesbeforemakingworkingsolution
5.RinseslidebyincubationslideinPBSfor3minutes.
PrimaryAntibody
6.TapoffexcessPBS.Apply200μlEquilibriumBufferimmediatelytocoverspecimenandincubateinamoistchamberfor30minutes
7.TapoffexcessEquilibriumBuffer.Apply200μldilutedanti‐CD31antibody(recommend1:50dilutioninAntibodyDiluent)tocoverspecimenimmediatelyandincubateinamoistchamberovernightat4°C.
8.Rinseslidebyincubationin0.5-2mLWashBufferfor3minutes.Repeatthissteptwicewithfreshbuffer.
9.RinseslidebyincubationofslideinPBSfor3minutes.
Secondary/HRPConjugates
10.TapoffexcessPBS.Apply200μlRabbitHRPPolymerimmediatelytocoverspecimenandincubateinamoistchamberfor60minutes.
11.Rinseslidebyincubationin0.5-2mLWashBufferfor3minutes.Repeatthissteptwicewithfreshbuffer.
12.RinseslidebyincubationinwithPBSfor3minutes.
DABChromogen
13.TapoffexcessPBS.ApplyenoughDABSubstrateSolutiontocoverspecimenimmediatly.Checkdarkbrowncolordevelopmentundermicroscopeandincubateuntildesiredstainintensitydevelops.
Tomake1mLDABSubstrateSolution,mixthefollowingreagents:
DistilledWater860μL
10XDABsubstratebuffer100μL
0.3%HydrogenPeroxidesolution15μL
DABChromogen25μL
14.Rinseslideintapwaterfor3minutes.
Counterstaining
15.Ifdesired,completecounterstain(Seeinstructionforhematoxylincounterstaining).Rinseintapwatertoclear.
Mounting
16.Immerseslidesin70%,80%,95%Ethanolfor2minuteseach,and100%Ethanolfor10minutestwicefollowedbyXylenefor5minutestwice.
17.Dryandmountslides.
IV.InstructionforHematoxylincounterstaining
1.Immerseslidesinhematoxylinsolution.Incubatefor30secondsto5minutes,dependingonthestrengthofhematoxylinused.
2.RinsetoclearwithtapwaterandcontinuedehydrationfromStep16.
Problems | PossIBLeCauses | Solutions |
Overstaining | 1.Toolongincubationtimeofprimaryantibody,ortoohightemperaturewhendoingstaining | Dependingontissuesections,theincubationtimeofprimaryantibodycanbereducedto30minutes;Checktheroomtemperaturerangeisat20‐250Cwhendoingstaining. |
Weakornostaining | 1.Incompleteremovalofparaffin | Deparaffinizesectionslongerorchangetofreshxylene;sometissuearraymayneedtobaketo |
Highbackground | 1Sectionsdriedduringstainingprocess | Donotallowsectionstodryduringstainingprocess;usehumidcontainerduringincubation 蚂蚁淘电商平台
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运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-04-17
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2021-08-14
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2021-08-30
上海研生实业有限公司所提供的前列腺特异性抗原(PSA)单克隆抗体免疫组化试剂盒质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息! 查看更多
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2021-08-23
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2021-08-07
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2018-04-17
上海研生实业有限公司所提供的PARP-1(cleaved p25)免疫组化试剂盒质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息! 查看更多
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2021-09-09
上海研生实业有限公司所提供的p21活化的激酶1免疫组化试剂盒质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息! 查看更多
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2018-12-26
Helper T cells are found in two distinct cell types, Th1 and Th2, distinguished by the cytokines they produce and respond to and the immune responses they are 查看更多
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2018-04-17
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2018-12-26
最重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗,注意抗体的特异性、效价和交叉反应,最好用单抗。其他常用试剂有:1、0.01M(pH7.4)的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),稀释抗体和洗片子用;2、清洁液、纯水,洗玻片用3、多聚赖氨酸处理载玻片,防止脱片4、固定液:4%多聚甲醛或冷丙酮等;5、15%~30%蔗糖,组织 查看更多
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2021-07-22
上海沪震实业有限公司在发布的即用型SABC-POD免疫组化试剂盒 (适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)供应信息,浏览与即用型SABC-POD免疫组化试剂盒 (适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)相关的产品或在搜索更多与即用型SABC-POD免疫组化试剂盒 (适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节,每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,因此,要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格 查看更多
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常见问题
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【求助】免疫组化试剂盒如何选用呢?谢谢指点 实验动物与组织学...123
zy0202021-07-30
大家好!我实验下一阶段准备做ELISA,检测人的韧带组织中的蛋白。
蛋白的类型为PDGF。其有一种二聚体为PDGF-BB。 请教第一点:我看了Elisa的说明书,现在检测PDGF有两种试剂盒,一种是检测PDGF的,要求的试剂样本为组织匀浆;一种是检测PDGF-BB的,要求的待测样本为血液或血浆。 我现在的实验目的是想更精确,检验组织中的PDGF-BB,但是手中的是人体韧带组织样本,非PDGF-BB试剂盒所要求的组织样本为血浆或血清,我不知道是否可以用PDGF-BB的ELISA试剂盒的来做,所以特地请教:) 请教第二点:市面上有RB公司的96T,2500元;另外有Uscnlife的Elisa试剂盒,96T的3680元,都说是原装进口的,我该如何选择呢?为何差价这么多?谢谢指点!
免疫组化pcna_免疫组化pcna【价格,厂家,图片,批发,采购】123
缘圆20112013-02-23
ELISA试剂盒用哪个好一点 免疫学讨论版123
夏忻佳诤12017-10-01
本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。做TUNEL和MMP-2、MMP-9的免疫组化
【求助】做免疫组化单单购买免疫组化试剂盒就够吗? 实验动物 丁香 ...123
lijh12342021-07-29
免疫组化试剂盒 123
yanwang3162017-10-01
免疫组化试剂盒我觉得上海徕卡的免疫组化试剂挺不错的,但是你说的证我不是很懂,总之你可以试一下。
【求助】做免疫组化单单购买免疫组化试剂盒就够吗? 实验动物与...123
246824682021-07-25
elisa试剂盒抗体能不能用于免疫组化?123
玩转TA00362017-10-01
elisa试剂盒抗体一般不能用于免疫组化。
一、免疫组化试剂盒一般包括: 1、特异性的一抗 2、免疫组化检测系统。 3、有的同时还具备显色系统。 二、不同的公司内容有差别,所以购买时一定了解清楚: 1、一抗是做人的还是兔、鼠的组织; 2、检测系统是ABC/SP/非生物素/其他; 3、试剂盒的内容都有什么?有没有显色系统? 4、如果没有,自己根据前面的检测系统需配哪个显色系统。(其他的辅助试剂如PBS缓冲液、抗原修复液等一般另卖或自配) 三、免疫组化抗体即指特异性一抗,是用来标记的指标,免疫组化过程的其他试剂一律另外配备。 另外:做实验时,如遇出结果困难,记得做阳性片对照,敢于怀疑检测系统或显色系统的问题。
试剂盒哪家好酶联免疫试剂盒哪家质量好123
jiangyinshen2021-07-23
【求助】免疫组化试剂盒选择问题 生物科学论坛学术科研...123
gb8209162021-08-03
【求助】请问进口的免疫组化试剂盒,比如罗氏或DAKO的,大概多少...123
ziyou0032021-07-24
最近想做个免疫组化试验,因为从来没做过,所以保险起见想先用进口试剂,请问一下进口试剂哪个牌子比较好,...
免疫组化试剂盒价格采购供应商信息123
fyh872566302021-08-11
【求助】北京中杉的免疫组化试剂盒的效果如何 细胞技术讨论版...123
dukaili2021-07-28
我做肉瘤的免疫组化,一抗用的ABCom,二抗和DAB用的博士德,但是做了几次都没有任何染色。由于烘箱60度烤片我只烤了20分钟,可能时间短了,但苏木素可以染上,是否说明烤片、脱蜡已足够。
用双氧水去除过氧化物酶时,我是自己配的3%双氧水滴到片上而非将片浸入双氧水,这样可否? 用博士德的DAB染色,配制方法为:1mlH20中加入DAB、H2O2、TBS各一滴,我配制的时候发现将DAB加入H20时很容易沉淀,要震荡才能混匀,且将配好的DAB滴到玻片上时,DAB会结为很小块的微颗粒悬浮在液体中但并不染色,是否DAB有问题? 现在打算换中衫的试剂盒,代理商说中衫的试剂盒包括了二抗和DAB,想请教一下该试剂盒的具体内容有些什么? 万分感谢! ▍
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