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Altogen/PGHAM Transfection Kit (Pancreatic Carcinoma)/0.5 ml/3233
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Altogen/PGHAM Transfection Kit (Pancreatic Carcinoma)/0.5 ml/3233
品牌 / 
Altogen Labs
货号 / 
3233
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TransfectionReagentforPGHAMCells(HamsterPancreaticCarcinomaCells)

  • Twocomponentformulationenhanceslipidmediatedtransfectionefficiency
  • Optimizedeasy-to-usetransfectionprotocolprovidedfortransfectionofsiRNA,DNA,mRNA,andmicroRNA
  • KitincludesTransfectionEnhancerreagentandrecommendedtransfectionprotocol
  • ReproducIBLetransfectionresults
  • Workswellforstandardreversetransfectionandhigh-throughputapplications
  • DownloadinvitroPGHAMtransfectionprotocol:[PDF]
  • Download PGHAMCRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
  • DownloadPowerPointpresentationforPGHAMcellstransfectionkit:[PPT]
  • DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems

TransfectionEfficiency:

Reagentexhibitsatleast90%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.

TransfectionProtocolandMSDS:

DownloadAltogenBiosystemsPGHAMTransfectionProtocol:[PDF]

DownloadMSDS:[PDF]

PGHAMCellLine:

Pancreaticcancerisafataldiseasewithlowsurvivalandhighmortalityrate,whichisconsideredasignificantpublichealthchallenge.DuetotheresistanceofpancreaticcancertorADIotherapyandchemotherapy,newtreatmentapproachesareurgentlyneeded.PreclinicalstudiesofthePGHAM-1celllinecanhelptounderstandtheetiologyofthediseasebetteranddiscovernewtherapiesforpatientswiththislife-threateningcondition.PGHAM-1celllinewasderivedfromanN-nitrosobis(2-oxopropyl)amine(BOP)-inducedpancreatictumorofaSyrianhamster(Mesocricetusauratus).Thetumorsweremincedandsubcutaneouslytransplantedwithatrocarintotheinterscapularareaofuntreated5-week-oldhamsters.Therecipienthamsterswerekilledat6–8weeksaftertransplantation,andaportionofthetumortissuewasseriallytransplanted.Aftersubcutaneoustransplantation,thetumorwasextractedundergerm-freeconditions.Cellsthathadbeenmaintainedinculturefor60passagesandhadbecomeestablishedasacelllinewerenamedPGHAM-1.Thetumorshowedastrikingsimilaritytohumanpancreaticductaladenocarcinomaandhadamoderatetowell-differentiatedhistology.PGHAM-1containsaK-raspointmutationatcodon12,oneofthemostfrequenttypesofK-rasmutationinhumanpancreaticcancers.ResearchershavefrequentlyusedPGHAM-1inexperimentsbecauseoftheircells’rapidgrowthandahighrateofmetastasis.PGHAMcellsarebeneficialinbiomedicalstudiesrelatedtopancreaticcancer.ThehamsterpancreaticcancercellsofthePGHAMcelllinegreatlyresemblehumanpancreaticcancercellsandarehenceusefulincancerresearch.AltogenBiosystemsprovideshigh-efficiencytransfectionkitsforthePGHAMcellline.

Data:

PGHAM Transfection Reagent

Figure1.CyclophilinBsilencingefficiencywasdeterminedbyqRT-PCRinthePGHAM cellstransfectedbyCyclophilinBsiRNAornon-silencingsiRNAcontrolfollowingtherecommendedtransfectionprotocol.CyclophilinmRNAexpressionlevelsweremeasured48hourspost-transfection.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheCyclophilinBdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataarepresentedasmeans±SD(n=6).

PGHAM-cells-transfection-protocol

Figure2.ProteinexpressionofCyclophilinBinPGHAMcells.DNAplasmidexpressingCyclophilinBorsiRNAtargetingCyclophilinBweretransfectedintoPGHAMcellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.

RequestaQuotefor
PGHAMTransfectionKit

AltogenBiosystems:

AltogenBiosystemsmanufacturerspreoptimizedtransfectionkitsforcancerresearch.Reagentsandtransfectionprotocolsareoptimizedforindividualcancercelllines.AltogenBiosystemsdevelopedtwotypesofinvivodeliverykitsforanimalresearch:Tissue-targetedreagents(deliveryintoliver,pancreas,andkidneytissues),andinvivobiodistributionreagents(PEG-Liposome,Nanoparticle,Lipid,andPolymer-basedkits).Optimizedtransfectionprotocolsprovideefficientintracellulardeliveryofproteins,DNA,andRNAmoleculesinvitroandinvivo.Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’sTransfectionResource.

AltogenLabsResearchServices:

AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BIOLOGyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).

VolumeOptions:

  • 0.5ml(Catalog#3233)
  • 1.5ml(Catalog#3234)
  • 1.5mlCRISPR(Catalog#2190)
  • 8.0ml(Catalog#7079)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

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For Protein Concentration Determination of Cell CultureDecant medium from 10cm dish of adherent cells and rinse plate rapidly with phosphate-buffered saline (P 查看更多>
SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。... 查看更多>
该软件可用于常规的影像分析,免疫荧光和免疫组化中组织细胞和染色的组织切片中的生物形态分析,组织培养和具有与流式细胞相似的工作台的细胞培养。该软件可以显示单个细胞,多细胞结构和宏观生物形态的特点的多种测量参数通过散点图上的蜂窝数据。以阴性对照为基础的不同分析背景上的 cut-off 值可以被设定以确定阴阳细胞比例,结构等。圈选功能可以确定感兴 查看更多>
一、设备和试剂1.设备① 电泳电源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 电泳仪及附件Mini-PROTEAN 3 El 查看更多>
Troubleshooting Tips for Western ImmunoblottingThe following tips can be used to overcome the most common problems encountered during Western blotting. Smeared 查看更多>
Lysis buffer.The choice of lysis buffer depends on what the cells were labeled with and whether you want to obtain an active kinase. The lowest background is o 查看更多>
2014 年全球癌症报告显示,近年来我国胃癌新增病例和死亡人数均居世界首位,全球接近 50% 的新发胃癌病例来自中国。 然而,我国对于胃癌的诊断、治疗以及患者预后预测方面的规范还亟需完善。 对于病理医师而言,除了给患者提供规范化和信息详尽的病理报告之外,还需要对胃癌组织进行相关标志物的免疫组化检测,从而对胃癌患者的个体化治疗和预后预测提供依据。胃 查看更多>
Author: Nanci DonackiSource: Contributed by Nanci DonackiReagents and MaterialsPBSPBS: 0.05M EDTAPBS: 0.01% thimerosalConjugate Storage BufferSATADMFHydroxylam 查看更多>
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。原理与Sou 查看更多>
Grow a 2 ml culture, 24 hr. at 30oC in selective media When culture is ready, use it to inoculate about 55 ml (50 ml plus 5 for O.D.600 readings) of selective 查看更多>
确定肿瘤的类型时,检测肿瘤细胞的增殖活性时,在某些肿瘤的组织病理诊断中,借助于检测肿瘤细胞表面或细胞内的一些特定的分子,称为肿瘤免疫组织化学标记物。确定肿瘤的类型,除了依靠其临床表现、影像学和形态学特点,还借助于检测肿瘤细胞表面或细胞内的一些特定的分子,例如通过免疫... 查看更多>
Antibody LabelingThin sections of biological material, mounted on specimen grids, can be easily labeled by floating them, section-side down, on small drops of 查看更多>
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如题,做了免疫组化,分析趋势的时候发现,总共染色强度0~,3分,着色百分率0~4分,最后相乘0~12...
免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术,对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化,在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果,又能看到细胞的形态,CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒,效果很好。
1)做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色,因为那样会掩盖阳性着色的结果;而且用苏木素复染细胞核也是淡染,若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变,除非有非常典型的表现,一般是有很大的难度的。
2)你是培养的细胞做免疫组化吗?如果是的话,那就每个样本只有一张片子吧?唯一的办法是进行免疫双染,同时做CD34和AFP(甲胎蛋白)。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。
3)用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化,也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是:早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片,重要的是看其组织学结构,对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞,还是培养的细胞,染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。
4)如果是切片,也就是说每个样本可以有多张切片,那可以在连续切片上分别染CD34和AFP,拍照时选择相同视野,也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。
5)用双染最大的问题在于:这两者都表达在胞浆中,染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下,可不可以用免疫荧光双染?这样也很有说服力的
免疫组化检查多少钱?__123
游客军团ra2017-10-02
免疫组化根据所做的指标的个数收费,比如做10个就收10个免疫组化,每个收费40-160元左右(每个省的定价不一样)。
在确诊乳腺癌的检查中,对穿刺活检和手术活检取得的组织,都要做常规病理检查。免疫组化是对取下的人体组织做进一步的处理,进行特殊的染色,这对于明确是不是癌症、是什么类型的乳腺癌有很大的帮助。如果常规病理尚不能确定肿块的性质,则需要进行免疫组化染色,以进一步明确疾病的性质。

我是做肝细胞肝癌和胆管细胞癌的免疫组化

这是之前的抗体做出来的效果,EDTA修复,1:400的浓度(抗体100微升,0.1mg/ml,价格3000多),效果很好。




后来过期了,就又买了一支(抗体100微升,0.2mg/ml,价格7000多,贵很多),过程一样,EDTA、高压、酶修复,浓度1:200300350400500都试过,4度过夜、封闭等,都试过,就是做不粗来。

现在就是淋巴细胞强阳,肿瘤不阳,谁能帮我看看什么原因。我已经找不到什么理由了




有没有朋友使用碧云天的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒做过细胞衰老,本人小白,求相关细胞处理的过程及数据分析方法。贴壁细胞六孔板需要接种多少,染色后怎样计数进行数据处理。谢谢啦!

血凝块中DNA的抽提方法123
知识就是命运2021-07-22


我是做肝细胞肝癌和胆管细胞癌的免疫组化

这是之前的抗体做出来的效果,EDTA修复,1:400的浓度(抗体100微升,0.1mg/ml,价格3000多),效果很好。







后来过期了,就又买了一支(抗体100微升,0.2mg/ml,价格7000多,贵很多),过程一样,EDTA、高压、酶修复,浓度1:200300350400500都试过,4度过夜、封闭等,都试过,就是做不粗来。



现在就是淋巴细胞强阳,肿瘤不阳,谁能帮我看看什么原因。我已经找不到什么理由了


一·第二代聚合酶两步法( PV,En Vision) PV-9000是2001年投入美国市场的,它是将二抗抗体分子的单价Fab段与酶聚合在一起,与一抗结合后,直接用底物进行显色的方法。此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成的背景染色,以有逐渐取代其他免疫酶组织化学检测方法的趋势。 PV法操作流程 1石蜡切片脱蜡至PBS。 2 0.3%H2O2甲醇液或3%H2O2室温孵育20min。 3 抗原修复。 4滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。 5 PBS洗涤。 6 酶标记二抗370C 30min或室温60min。 7 DAB(0.04%)显色(镜检控制),水洗、复染、封片二·sp法是一抗+生物素化二抗+HRP标记的链霉卵白素(HRP标记的亲和素) 一般的sp法步骤啊,具体如下: 1.烤片,68℃,20分钟, 2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min 3.阻断 灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min; 4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min。 5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗. 6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照); 滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min; 8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后, 苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。三·检测试剂盒 灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想也是免疫组化染色优劣的关键,根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配,否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的,二抗就应该是羊或兔抗鼠的。四·建议选SP,亦可根据实验室习惯及在组织中的表达情况来定

本人新手,最近做免疫组化,需要双染确定细胞。预实验做了两个抗体的单染,效果都不错。但是准备做双染的时候发现实验室里的双染试剂盒两个都是抗鼠的。而我之前两个一抗都是兔抗体。现在只能重新订购了。请问前辈们有相关推荐吗?

请问有内有大神使用ABC法或SABC法进行蜡块免疫组化染色的,有ABC法的国产二抗试剂盒没,使用过的留个试剂公司名称和货号好吗?
免疫组化中,所染色的蛋白的位置与该蛋白的特性有关系。在现有所研究的蛋白中,不少蛋白存在核转位的情况, 也就是说当细胞培养的环境或者刺激的因素不同,该蛋白会出现从胞浆到细胞核的表达位置的改变。有时候表达不变仅仅是从胞浆转位到细胞核,有时候还伴有表达的上调,比如nf-kb。
我打算从中山公司定SANTACRUZ公司的mmp-9抗体,但是听师姐说这个公司
的抗体不容易染色,哪为同仁有这方面的经验?另外基因公司卖的cellsignalingtechnology的抗体要1875元,而中山公司卖的这个抗体只有800多,其中差距在哪里?请赐教