一、脱蜡和水化 方法同SP法。 二、第一抗体的染色 1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10min，PBS冲洗3min×3次； 2、加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10min，倒掉（不能冲洗）； 3、加入一抗（按照说明书推荐浓度和孵育条件）； 4、使用含有0.05%吐温20的PBS(TPBS)，冲洗5min×3次； 5、加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2)，室温孵育10min； 6、用TPBS冲洗5min×3次； 7、加入100ul（2滴）链霉亲和素-AP（试剂3）的二抗，室温孵育10min； 8、用TPBS冲洗5min×3次； 9、准备底物溶液：将1滴试剂4A和4B加入到1ml去离子水中，充分混匀。再加入1滴试剂4C，充分混匀； 10、加100ul（2滴）配好的AP底物溶液，室温孵育（镜下掌握孵育时间）； 11、使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应。 三、第二抗体的染色 12、加100ul（2滴）双染增强剂（试剂7），孵育； 13、用TPBS冲洗3min×3次； 14、加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10min，倒掉（不能冲洗）； 15、加入稀释好的一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件）； 16、用TPBS冲洗5min×3次； 17、加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2)，室温孵育10min； 18、用TPBS冲洗5min×3次； 19、加入100ul（2滴）链霉亲和素-HRP（试剂5）的二抗，室温孵育10min； 20、用TPBS冲洗5min×3次； 21、准备底物溶液：将1滴试剂6A和6B加入到1ml去离子水中，充分混匀。再加入1滴试剂6C，充分混匀； 22、加100ul（2滴）配好的HRP底物溶液，室温孵育（镜下掌握孵育时间）； 23、使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应； 24、使用复染试剂染色（根据需要选择）； 25、封片剂（试剂8）封片，显微镜观察并拍照。
