
Info
Tested applications:ELISA; FACS; Confocal laser scanning microscopy
Recommended dilutions:ELISA: starting 1:800 v/v; FACS: starting 1:100 v/v;Confocal laser scanning microscopy: starting 1:100 v/v.
Note: When using any primary antibody or fluorescence-labelled secondary antibody for the first time, titrate out the antibody to determine which dilution allows the strongest specific signal with the lowest background for your sample.
Purity:Polyclonal immunoglobulins purified by protein A affinity chromatography.
Form:Liquid. Supplied in 100mM sodium citrate, 50mM Tris and 0.05% v/v glycerol. Neutral pH.
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另一类抗原是手术移植的器官,如异体移植的肾、肝或其他结构。因为这个器官并不是受植者本人的结构,会被人体免疫系统认为是入侵人体的抗原,并对其进行攻击,这就是所谓的排斥反应。
,表示体内感染了HBV,因而是一种特异性标志。HBsAg阳性见于:①急性乙型肝炎的潜伏期或急性期(大多短期阳性);②HBV致的慢性肝病、迁延性和慢性活动性肝炎、肝炎后肝硬化或原发性肝癌等。③无症状携带者。
(2)抗HBs:表示曾感染过HBV,均已得到恢复,并且对HBV有一定的免疫力。
(3)HBcAg与抗HBc:由于
HBcAg主要存在于肝细胞核内,并仅存在于Dane颗粒中。因此,对病人血清不能检测HBcAg,而测抗HBc。血清内抗HBc阳性反映:①新近有过HBV感染;②体内有HBV增殖;③有助于诊断乙型肝炎。
(2)HBcAg和抗HBe:HBcAg的存在常表示病人血液有感染性。
HBcAg阳性揭示病人肝脏可能有慢性 损害,对预后判断有一定帮助。抗HBe阳性对病人可能有一定的保护力。
检测乙肝抗原与抗体的实际用途:
(1)筛选供血员。
(2)可作为乙肝病人或携带者的特异性诊断。
(3)对乙肝病人预后和转归提供参考。
(4)研究乙肝的流行病学,了解各地人群对乙肝的感染情况。
(5)判断人群对乙肝的免疫水平。
抗原修复是公认的免疫组化比较关键的一个步骤,因为我们多使用福尔马林或多聚甲醛溶液来固定组织。甲醛与蛋白质发生交联反应,覆盖抗原决定簇,极大的影响了我们的实验结果,甚至时出现假阴性的现象。抗原修复过程是由少数主要影响因素和许多非主要因素共同影响的复杂过程(这是我总结的最复杂的语句哈哈!)。如何抽丝剥茧抓住主旨呢?这需要我们对抗原修复有一个整体的认识,以不变应万变。下面通过几个小问题,带领大家去认识抗原修复:
Question1:为什么免疫组化要做抗原修复?
答:这位观众的问题很不错!简单直达要害。
我们为了得到更好的实验结果,在免疫组化过程中会对样品材料进行固定,一般常用的就是福尔马林或者多聚甲醛溶液。科学研究已经证明甲醛的醛基与蛋白质发生交联反应,不同程度的遮蔽了抗原表面的抗原决定簇,影响其与抗体结合。其发生交联反应形成的究竟是什么还没有定论,有人说形成的是醛基,有人说形成的是羧甲基。但不管是什么,都会使抗原表面的决定簇减少,影响实验结果,甚至产生假阳性。当然如果您使用的是一些其他的固定液(非醛类)就不用抗原修复了。
Question2:怎样才能获得理想的抗原修复结果呢?
答:我个人认为是主要有两方面:一是抗原修复方法的选择和修复液的搭配;二是操作人的手法和对实验的理解程度。
总的来说,是个搭配并且需要摸索的过程。需要把握的是抗原修复的实质是选对方法,然后用高压或者微波加热的手段打开甲醛与蛋白质的交联,也就是打开化学键的过程,你只要选对方法,通过温度和时间的改变来控制强度,试验并没有想像的那么难。
Question3:所有经甲醛或者多聚甲醛固定的组织都需要进行抗原修复吗?
答:绝大部分用甲醛固定的组织都需要进行抗原修复,但是也有例外。拿个中文文献举个例子《不同抗原修复法对免疫组化HBcAb染色结果》。它的结果恰恰是不修复的切片染色效果最好。推测的原因是HBcAg是乙肝病毒的壳结构蛋白,并非肝组织本身的,因而甲醛并不一定封闭它。相反的是如果你进行高压热修复,反而会让未被封闭的蛋白变性,那实验结果可想而知。(好像就没听说过学术界有保准的事,哈哈!)
Question4:抗原修复的方法有几种?如何来选择呢?
答:抗原修复的方法主要分为三大类:
①高压热修复
②微波热修复
③酶消化法
我们针对不同的抗原,采取不同的修复方法,取得较理想的染色效果。常用的免疫组化抗原修复主要有微波加热修复法、高温高压修复法和酶消化修复法等方法,抗原修复液主要是枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)和EDTA缓冲液(pH=8.0或pH=9.0)。抗原修复的方法选择,我们首先看抗原的定位,是位于细胞膜、细胞质还是细胞核。这三个位置的抗原修复难易程度排序:细胞质抗原>细胞膜抗原>细胞和抗原。
4个FAQ帮你全面了解免疫组化的抗原修复.docx(18.03k)
抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
这血清里含有抗体。当然也含有抗原,可以刺激机体产生免疫反应
抗原在体内可以引起免疫反应。抗体是由抗原刺激机体产生的,能与抗原特异性结合是抗原失去毒性的球蛋白。
也就是说,该教授感染的sars病毒是抗原。使他患病,而另一个已痊愈的非典病人,由于感染过非典,体内产生过抗体。这时候抗体就在病人的血清中,该教授用权与病人的血清注射相当于注射了抗体,于是抗体消灭了抗原,并就好了。
免疫的过程比较复杂,一般是这样的。
抗原经过吞噬细胞处理之后,露出了抗原决定簇,抗原决定簇决定了抗原的特异性。
然后吞噬细胞将抗原信息船体给T淋巴细胞,然后T淋巴细胞吧抗原信息传递给B淋巴细胞。这时候B淋巴细胞接受刺激,分裂分化成效应B细胞,和记忆细胞。效应B细胞立刻合成有关抗体,使抗原发生特异性凝结,就是抗原失效,然后再有吞噬细胞等吧抗原消灭。
另外当相同抗原再次刺激机体是,记忆细胞就会直接分化成效应b细胞,分泌抗体,消灭抗原,这个过程叫做二次免疫。我们的疫苗应用的就是二次免疫效果迅速强烈的原理。
当然也有一些抗原不需要T细胞,直接有吞噬细胞处理后呈递给B细胞。

