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제품특징
□ 특징
● 목적 단백질의 발현 수준을 정밀하고 신속하게 직접 조절
● 단일 vector 시스템
● 많은 세포와 단백질에서 검증된 시스템
● 어떤 promoter와도 함께 사용 가능
□ 간편하고 효과적인 기술
ProteoTuner system은 목적 단백질을 in vivo에서도 신속하게 직접 조절 가능한 매우 독창적인 기술이다. 단백질 기능 연구를 위한 강력한 이 기술은 2 가지 핵심 요소로 구성 되어 있다.
● 12 kDa destabilizing domain (DD)이 목적 단백질과 융합 발현되면 단백질을 불안정화시켜 proteosomal degradation
과정으로 유도한다. DD coding sequence는 vector의 multiple cloning site (MCS)에 인접하여 존재한다.
● Shield1은 세포막 투과성이 있는 750 Da의 작은 molecular ligand로 DD와 융합된 단백질이 분해되지 않도록 보호한다.
Shield1은 DD 융합 단백질을 안정화시켜 "protein on" 상태로 유도하여 세포 내에 단백질이 축적되도록 한다. 이 안정화는 단지 15 분~30 분 정도의 짧은 시간 안에 이루어진다 (1). 그러나 배지교환을 통해 Shield1을 배지에서 제거하면 세포 내에 축적되어 있던 DD 융합 단백질은 빠르게 분해되어 "Protein off" 상태가 된다.따라서 Shield1의 농도 조절을 통해 세포 내 목적 단백질의 안정화를 조절하여 단백질의 발현 양을 조절할 수 있으며, 단백질 발현의 on/off 과정은 가역적이며 반복적으로 조절이 가능하다.
Figure 1. Ligand-dependent, targeted and reversible protein stabilization. A small destabilization domain (DD; blue) is fused to a target protein of interest. The small membrane-permeant ligand Shield1 (red) binds to the DD and protects it from proteasomal degradation. Removal of Shield1 causes rapid degradation of the entire fusion protein. The default pathway for the systems is degradation of the fusion protein, unless Shield1 is present.
□ 다양한 분야에 적용 가능한 시스템
● 세포내 도입 방법 : ProteoTuner system은 lentivirus 용이나 retroivirus 용 그리고 일반적인 plasmid 형태로 구성되어 있으며,
transfection control로 형광단백질을 발현할 수 있는 형태와 발현할 수 없는 형태로 구성되어 있다.
● DD 서열의 융합부위를 N-말단 또는 C-말단 선택 : ProteoTuner system은 DD domain이 N-말단에 융합되거나 C-말단에
융합되는 2 가지 형태로 제공되고 있으므로 실험에 따라 적절한 DD 사용이 중요하다. DD-C (ProteonTuner C system)는 C-terminal tag로 적합하고 일반적인 DD는 N-terminal tag를 이용하는 것이 적합하다.
□ 단백질 발현 수준을 조절하면서 항체나, Chemiluminescent tag으로 관찰
● DD Monoclonal Antibody는 N-말단과 C-말단의 DD를 특이적으로 검출할 수 있다. Western blot이나
immunocytochemistry로 세포 용해 후 융합 구조를 식별하고 확인할 수 있다. Antibody는 DD-AcGFP1을 일시적으로
transfection 한 10,000 개 이하의 세포에서도 DD-tag 단백질을 검출 할 수 있을 정도로 매우 민감도가 높다.
● ProteoTuner Quantitiation System에 포함된 vector는 DD-tag (발현조절)와 ProLabel-tag (정량)를 가지고 있다.
이 vector의 multicloning site (MCS)에 목적 단백질을 발현하는 유전자를 cloning하면 N-말단에 DD coding sequence와
C-말단에 6 kDa의 ProLabel-tag가 결합된 단백질이 발현된다. DD로 조절되는 단백질의 발현 정도는 ProLabel 검출
시약으로 쉽게 검출할 수 있다.
Figure 2. Easy detection of DD fusions with the DD Monoclonal Antibody. Cell lysates from HeLa cells transiently expressing either DD-AcGFP1 or AcGFP1-DD, and HEK 293 cells stably expressing DD-AcGFP1, were analyzed by Western blot using the DD Monoclonal Antibody at a 1:500 dilution. Lane 1: HeLa cells transfected with pDD-AcGFP1 (e.g., DD-N).Lane 2: Negative control (untransfected HeLa cells). Lane 3: HeLa cells transfected with pAcGFP1-DD (e.g., DD-C). Lane 4: Negative control (untransfected HEK 293 cells). Lane 5: HEK 293 cells stably expressing DD-AcGFP1.
□ 유도발현의 이중 조절
pTRE-Cycle Vector는 다수의 단백질 발현을 이중으로 조절 가능하다 (Figure 3). 우선 DD로 융합된 목적 단백질은 Tet-inducible system에 의한 전사 조절과 ProteoTuner system에 의한 단백질 분해 조절을 통하여 이중으로 발현이 조절되며, 다른 또 하나는 목적 단백질이나 형광 단백질 (mCherry 또는 ZsGreen1)은 Tet-inducible expression 만으로 발현을 조절한다.
Figure 3. pTRE-Cycle Vectors for two-tiered expression control. pTRECycle1 allows you to coexpress two proteins of interest-one with a DD tag and one without. pTRE-Cycle2 and pTRE-Cycle3 allow you to inducibly coexpress a red or green fluorescent protein along with your DD-tagged protein of interest.
□ Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
□ References
1. Banaszynski, L. A. et al. (2006) Cell 126(5):995-1004.
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1.抗原性是指抗原与其所诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力。抗原性的强弱与抗原分子的大小、化学成分、抗原决定簇的结构、抗原与被免疫动物亲缘关系的远近等有密切关系。通常认为抗原的分子量愈大、化学组成愈复杂、立体结构愈完整以及与被免疫动物的亲缘关系愈远，则抗原性愈强。
2.免疫原性是指能够刺激机体形成特异抗体或致敏淋巴细胞的能力。即指抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质抗体和致敏淋巴细胞的特性。也指抗原刺激机体后，机体免疫系统能形成抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫反应。
可与MHCⅡ类分子结合的都是蛋白性抗原；多糖和脂类不易于MHCⅡ类分子连接，难以被TH细胞识别，因而多不是良好的免疫原；但有时可以诱导抗体性免疫应答。 抗原递呈（antigenpresentation）是辅佐细胞向辅助性T细胞展示抗原和MHCⅡ类分子的复合物，并使之与TCR结合的过程。这个过程是几乎所有淋巴细胞活化的必需步骤。抗原递呈之前，经处理后的抗原肽段已经连接在MHC分子顶端的槽中，这个复合物便是TCR的配体。TCR与配体结合的精确模式尚未清楚，一个合理的说法是TCR中α和β链的V段接触MHC分子的α螺旋（形成MHC分子顶端槽的肽段），使高可变的连接部（V-J及V-D-J）与抗原肽段相结合。这样保证了TCR识别抗原的特异性。
超抗原的递呈有独特的模式，它不需要胞内处理，可以直接与MHCⅡ类分子结合。超抗原不结合在MHCⅡ类分子的顶端槽中，而是结合在槽的外侧；与TCR结合时，不结合其α链，只结合β链的V节段。超抗原对TCR和MHCⅡ类分子的结合都非常牢固，象一支双向钩子将T细胞和辅佐细胞紧紧地连在一起，很容易使T细胞活化。另外，任何超抗原都只与含特殊β链V节段的TCR结合，这样的TCR约占外周T细胞总数的1%～10%，这一数字远远大于任何普通抗原所能识别的细胞数；所以某些产毒细胞感染时，容易发生急性期素休克综合征，就是超抗原刺激的结果。向左转|向右转
我们自身的细胞，蛋白也是抗原，但是自体在正常情况下没有针对自身的抗体。抗体产生的过程很复杂，我简单说一下：抗体由B细胞产生。本质是蛋白质。B细胞在成熟的过程中，编码抗体抗原识别区的那段基因会发生随机组合，这样就有可能会产生无数种抗体。但是如果一个B细胞产生了针对自身的抗体，那这个细胞就会和抚养它的细胞发生过于紧密的接触，被杀死。如果一个B细胞产生的抗体还不能识别任何抗原，那它就得不到足够的生长刺激，所以也不能存活。最后成熟的免疫细胞只占很小一部分。只有那些可以识别外源抗体的B细胞才能得到刺激，大量增殖。然后体内的抗体就增高了。
所以你的最后一句话不对。并不是人人都可以对任何抗原产生抗体的。比如青霉素过敏，过敏的人就是因为体内有针对青霉素的抗体IgE。而其他人就没有抗体。
