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一朵鲜花,点缀不出绚丽的春天;一个音符,谱写不了动人的乐谱;一朵浪花,汇聚不成浩瀚的大海,一颗星星,点缀不了寥廓的星空。接下来小编讲讲怎样确定ELISA抗原和抗体的稀释倍数 在运用ELISA方法测定抗体方面,通常所用的方法称为间接法,也是目前最常用的方法,其原理:间接法首先用抗原包被于固相载体,这些包被的抗原必须是可溶性的,或者至少是极微小的颗粒,经洗涤,加入含有被测抗体之标本,再经孵育洗涤后,加入酶标记抗抗体,(对人的标本 查看更多>
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甲肝抗原技术合作支持HepatitisAantigen260207北京科兴中维生物技术有限公司甲肝抗原技术合作支持 查看更多>
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产品名称: 兔增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA Kit(elisa试剂盒) 国内优质ELISA厂家 产品简介: 兔增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA Kit(elisa试剂盒)国内优质ELISA厂家 ELISA试剂盒 国产现货 SIXIN生产的优质ELISA试剂盒直供全国。http://www.aatbio.com.cn/elisa/ 兔增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA Kit(elisa试剂盒)国内优质ELISA厂家 进口 查看更多>
产品名称: 糖类抗原50 ELISA试剂盒 国内优质ELISA厂家 产品简介: 糖类抗原50 ELISA试剂盒 国内优质ELISA厂家 ELISA试剂盒 国产现货 SIXIN生产的优质ELISA试剂盒直供全国。http://www.aatbio.com.cn/elisa/ 糖类抗原50 ELISA试剂盒 国内优质ELISA厂家 进口试剂采购网,上海通善生物科技有限公司(BioLeaf)旗下生命科学研究B2C一站式采购平台。 进口试剂采购 查看更多>
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各位大神们:

本人在做ELISA(双抗体夹心)实验时,同一实验重复,4次,同样的条件,同样的试剂,只是每次实验的天数不一样,隔一天做一次。包被抗体(0.25ug/ml)、检测抗体(1ug/ml)和抗原(最高浓度为10ng/ml)的浓度都没有变,但检测结果却从1.4降到了0.8,又降到0.4,最后降到0.17(抗原最高浓度对应的OD值)。实在分析不出是什么原因,难道是抗原抗体保存的问题吗?

抗原抗体分装后一直保存在-20,用的时候才拿出来,用完放4度,没有反复冻融。但捕获抗体的最初浓度是86ug/ml,会不会是保存浓度太低?

请各位大神指教呀~

抗原一般是指进入机体内的外来物质,如细菌、病毒、花粉等;抗原也可以是不同物种间的物质,如马的血清进入兔子的体内,马血清中的许多蛋白质就成为兔子的抗原物质;同种异体间的物质也可以成为抗原,如血型、移植免疫等;自体内的某些隔绝成分也可以成为抗原,如眼睛水晶体蛋白质、精细胞、甲状腺球蛋白等。
在肝脏病中,病毒性肝炎最多,当病毒或细菌一类病原体侵入体内时,为了与病原体对抗,体内会制造出“抗体”或“淋巴球”。在医学上把发动此种对抗而调动起的防御机构称为“免疫反应”。
抗体是属于у-球蛋白,或是淋巴细胞,都是对某种抗原反应而形成的;它附着在抗原上,起着抑制抗原的作用。如果抗体完全抑制了抗原,即使我们感染了病毒或细菌,也会在不知不觉中战胜疾病。相反,当抗原势力超过抗体时,疾病则会恶化。
一旦体内产生抗体时,当下次相同的病原体侵入时,会比前次更快发动免疫机构,将疾病防患于未然。许多病毒性疾病患者,经过一次治疗后便不再发病,是因为身体内已有了免疫的机构。
一道题说一个医学教授不幸感染了SARS,他冒险把已痊愈的非典的病人的血清注射进自己体内,结果好了,这血清抗原还是抗体
食品安全快速检测是近些年来一个热门放,想请教各位国内外生物公司有哪些在这方面开发上做的抗原抗体很好的?主要有氯霉素,孔雀石绿,硝基呋喃,喹诺酮,磺胺类,真真菌毒素类。
相关疾病:乙型肝炎慢性乙型肝炎男性,30岁。四年前乙肝六项示1.3.5阳性,肝功能重度损害,启用替比夫定抗乙肝病毒。三年前复查乙肝六项示1.5阳性。后持续抗病毒治疗至今,肝功能持续正常,乙肝病毒dna持续低于检测下限,乙肝六项仍为......
抗原性
抗原与其所诱导产生的抗体或致敏淋巴细胞特异性结合的能力。抗原性的强弱与抗原分子的大小、化学成分、抗原决定簇的结构、抗原与被免疫动物亲缘关系的远近等有密切关系。通常认为抗原的分子量愈大、化学组成愈复杂、立体结构愈完整以及与被免疫动物的亲缘关系愈远,则抗原性愈强。抗原的物理状态也对抗原性发生影响,例如蛋白质,聚合状态的比单体的抗原性强,一般球形分子的比纤维形分子的抗原性强。抗原加入佐剂改变物理状态后,抗原性也得到增强。例如,分子量高达10万的明胶由于缺乏苯环氨基酸,稳定性较差,在进入机体后容易被酶降解成低分子物质,如果加入少量酪氨酸(苯环氨基酸),就能增强其抗原性。

中文名:抗原性
外文名:antigenicity
别称:免疫反应性
抗原性介绍:流感病毒按抗原性
一般认为,T、B淋巴细胞能够接受抗原的刺激,是因为在它们的表面具有一种与抗原决定簇构型相对应(互补)的结构,这种结构叫“抗原受体”。 抗原受体具有特异性,所以T、B细胞均属于抗原特异性淋巴细胞。
B细胞的抗原受体就是镶嵌在脂质双层中的膜结构蛋白,叫做膜表面免疫球蛋白(SmIg)。每个淋巴细胞克隆,只具有识别某一抗原决定簇的受体,每个淋巴细胞也只能产生某一种特异性抗体,这也是单克隆抗体只针对某一种抗原决定簇反应的基础。体内有千万种淋巴细胞克隆,所以机体能对各种不同的抗原性异物进行识别,从而发生免疫应答。
T细胞的抗原受体(T cell receptor, TCR)与CD3呈复合物形式存在于抗原特异性T细胞表面。在识别靶细胞过程中还有赖于非特异性的其他表面分子辅助,这些分子主要包括CD4、CD8、MHCI、MHCII类分子、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1,即CD54)、LFA-2(CD2)和 LFA-3(CD58)。TCR的多肽链是异质的,根据抗原结构和编码基因不同,已发现有a, b, g和d四种多肽链,据其组成不同,可分为两种类型,即abTCR和gdTCR。大多数TCR是abTCR,其中CD4+abTCR T细胞可识别非己MHCII类抗原(同种异体抗原)或自身MHCII类抗原与外来抗原复合物。abTCR识别外来抗原必须经过抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC)的加工处理,在外来抗原与APC表面MHC抗原结合成复合物才能被Th细胞识别。少数TCR由gd链组成,对gdTCR在体内的生理功能尚未完全清楚。
输血是抢救大失血或治疗其它疾病的有效措施。红细胞凝集不同于红细胞叠连,前者是一种免疫反应,红细胞一旦发生凝集后,就不再散开。最终是由于抗原一抗体反应使细胞破裂,发生溶血;红细胞叠连只是红细胞的暂时聚合,一经震荡即可散开。根据遗传学关系,血型可分为若干血型系统,其中与临床医学关系最密切的是ABO血型系统和Rh血型系统。一.ABO血型系统 ABO血型系统是根据红细胞膜所含的凝集原(即血型抗原)的不同或有无,将血液分为四个基本类型。凡红细胞膜只含有 A凝集原的为 A型,只含 B凝集原的为 B型;A、B两种凝集原都有的为AB型;无A、B两种凝集原的为O型。另一方面,血清(或血浆)中还存在着与凝集原相对应的天然抗体,称为抗A或抗B凝集素(即血型抗体)。A型血清中含抗 B凝集素;B型血清中含抗A凝集素;AB型血清中无抗A抗B凝集素;O型血清中含抗A、抗B凝集素。 在输血过程中,红细胞的A凝集原与血清中的抗A凝集素相遇时,会引起凝集反应,使红细胞凝集、溶血。同理,红细胞的B凝集原与血清中的抗B凝集素相遇时,亦会引起凝集反应。由此可见,A型者与 B型者之间的血液不能互输。临床上的输血都要求输同型血,并要做交叉配血试验。其方法是:分别提取给血人和受血人的红细胞和血清,然后将红细胞加到对方的血清中,检查有无凝集反应。把给血人的红细胞加到受血人的血清中称为主侧面;把受血人的红细胞加到给血人的血清中称为次侧面。若主侧和次侧均无凝集反应,即为配血相合,可以输血。若主侧和次侧均有凝集反应,即为配血不合,不能输血。若主侧无凝集反应,次侧有凝集反应,则为配血基本相合,只能缓慢少量输血。若次侧没有凝集反应而主侧有凝集反应,也为配血不合,不能输血。在紧急情况下,找不到同型血液时,则可按给血者的红细胞不被受血者血清所凝集的原则,即主侧不凝者可允许少量(一般不超过300毫升)、缓慢地输血。由于O型血液的红细胞无AB凝集原,在必要时可输给其它血型的受血者,故有“万能给血者”之称。而AB型血液的血清中无凝集素。在必要时可接受其它型血液,故有“万能受血者”之称。 在选用异型血液输血时,为什么只要求给血者输入的红细胞不被受血者的血清凝集,而不担心给血者输入的血浆中的凝集素会使受血者体内的红细胞发生凝集?这是由于血型不合时,给血者输人的红细胞在受血者血液中到处会遇到足够浓度的凝集素,使之发生凝集。因此,交叉配血试验主侧凝集者绝对不许输给,而输入的血浆中所含的凝集素,则因给血者输入的血液远少于受血者体内的血量,使输入的凝集素被受血者的血浆高度稀释,其浓度急剧下降到不致使受血者红细胞发生凝集的程度。故交叉试验主测不凝集、仅次侧凝集者,可以谨慎地少量输血。二.Rh血型系统 Rh血型抗原(即Rh凝集原、或称Rh因子),最先在恒河猴的红细胞中发现。分析人类红细胞膜上的Rh抗原有C、c、D、d、E、e六种,其中D抗原的抗原性最强。凡红细胞含有D抗原的称为Rh阳性,不含D抗原的称为Rh阴性。Rh血型系统的特点是人类血清中不存在与 Rh抗原起反应的天然抗体。故 Rh阴性的受血者第一次接受 Rh阳性的血液,不会发生凝集反应。但由于输入Rh阳性血液后,可使受血者产生Rh抗体,以后再输入Rh阳性血液时,会使输入的Rh阳性红细胞发生凝集反应。在妇儿科临床工作中,可见Rh阴性的妇女孕育了Rh阳性的胎儿后,Rh阳性胎儿的红细胞因某种原因(如少量胎盘绒毛脱落进入母体循环)进入母体后,也可使母体产生 Rh抗体。因此,第二次妊娠时,母体 Rh抗体(主要 Igh),可透过胎盘进入胎儿体内,使Rh阳性胎儿发生溶血性贫血,严重者甚至死亡。 在我国汉族和其它大多数民族中, Rh血型呈阳性占 99%,阴性占 l%。因此,在一般临床工作中意义不大。但在有的少数民族中Rh阴性者较多,如塔塔尔族占15.8%,苗族占12.3%,布依族和乌孜别克族为8.7%。因此在Rh阴性率较高的民族地区,临床工作者必须加以注意。

抗原修复是公认的免疫组化比较关键的一个步骤,因为我们多使用福尔马林或多聚甲醛溶液来固定组织。甲醛与蛋白质发生交联反应,覆盖抗原决定簇,极大的影响了我们的实验结果,甚至时出现假阴性的现象。抗原修复过程是由少数主要影响因素和许多非主要因素共同影响的复杂过程(这是我总结的最复杂的语句哈哈!)。如何抽丝剥茧抓住主旨呢?这需要我们对抗原修复有一个整体的认识,以不变应万变。下面通过几个小问题,带领大家去认识抗原修复:

Question1:为什么免疫组化要做抗原修复?

答:这位观众的问题很不错!简单直达要害。

我们为了得到更好的实验结果,在免疫组化过程中会对样品材料进行固定,一般常用的就是福尔马林或者多聚甲醛溶液。科学研究已经证明甲醛的醛基与蛋白质发生交联反应,不同程度的遮蔽了抗原表面的抗原决定簇,影响其与抗体结合。其发生交联反应形成的究竟是什么还没有定论,有人说形成的是醛基,有人说形成的是羧甲基。但不管是什么,都会使抗原表面的决定簇减少,影响实验结果,甚至产生假阳性。当然如果您使用的是一些其他的固定液(非醛类)就不用抗原修复了。

Question2:怎样才能获得理想的抗原修复结果呢?

答:我个人认为是主要有两方面:一是抗原修复方法的选择和修复液的搭配;二是操作人的手法和对实验的理解程度。

总的来说,是个搭配并且需要摸索的过程。需要把握的是抗原修复的实质是选对方法,然后用高压或者微波加热的手段打开甲醛与蛋白质的交联,也就是打开化学键的过程,你只要选对方法,通过温度和时间的改变来控制强度,试验并没有想像的那么难。

Question3:所有经甲醛或者多聚甲醛固定的组织都需要进行抗原修复吗?

答:绝大部分用甲醛固定的组织都需要进行抗原修复,但是也有例外。拿个中文文献举个例子《不同抗原修复法对免疫组化HBcAb染色结果》。它的结果恰恰是不修复的切片染色效果最好。推测的原因是HBcAg是乙肝病毒的壳结构蛋白,并非肝组织本身的,因而甲醛并不一定封闭它。相反的是如果你进行高压热修复,反而会让未被封闭的蛋白变性,那实验结果可想而知。(好像就没听说过学术界有保准的事,哈哈!)

Question4:抗原修复的方法有几种?如何来选择呢?

答:抗原修复的方法主要分为三大类:

①高压热修复

②微波热修复

③酶消化法

我们针对不同的抗原,采取不同的修复方法,取得较理想的染色效果。常用的免疫组化抗原修复主要有微波加热修复法、高温高压修复法和酶消化修复法等方法,抗原修复液主要是枸橼酸盐缓冲液(pH=6.0)和EDTA缓冲液(pH=8.0或pH=9.0)。抗原修复的方法选择,我们首先看抗原的定位,是位于细胞膜、细胞质还是细胞核。这三个位置的抗原修复难易程度排序:细胞质抗原>细胞膜抗原>细胞和抗原。





4个FAQ帮你全面了解免疫组化的抗原修复.docx(18.03k)
1、抗原:是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合,发生免疫效应(特异性反应)的物质。抗原的基本特性有两种,一是诱导免疫应答的能力,也就是免疫原性,二是与免疫应答的产物发生反应,也就是抗原性。

2、抗体:是指机体的免疫糸统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。灵长类动物主要有四种免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、和IgE,而免疫血清检查主要检测IgG和IgM抗体。