
Description | AKT protein family, which members are also called protein kinases B (PKB) plays an important role in mammalian cellular signaling. In humans, there are three genes in the "Akt family": Akt1, Akt2, and Akt3. These genes code for enzymes that are members of the serine/threonine-specific protein kinase family. Akt1 is involved in cellular survival pathways, by inhibiting apoptotic processes. Akt1 is also able to induce protein synthesis pathways, and is therefore a key signaling protein in the cellular pathways that lead to skeletal muscle hypertrophy, and general tissue growth. Since it can block apoptosis, and thereby promote cell survival, Akt1 has been implicated as a major factor in many types of cancer. Akt (now also called Akt1) was originally identified as the oncogene in the transforming retrovirus, AKT8. AKT8 was isolated by Stephen Staal in the laboratory of Wallace P. Rowe; he subsequently cloned v-akt and human AKT1 and AKT2 while on staff at the Johns Hopkins Oncology Center.Akt2 is an important signaling molecule in the Insulin signaling pathway, it is required to induce glucose transport. Franke et al. (1995) show that AKT1 and AKT2 are activated by PDGF. The activation was rapid and specific, and it was abrogated by mutations in the Akt Pleckstrin homology (PH) domain. They identify that Akt is a novel target of PI 3-kinase and suggest that the Akt PH domain may be a mediator of PI 3-kinase signaling. |
Catalog Number | IW-PA1301 |
Quantity | 9 ml |
Host | Rabbit |
Clone | Polyclonal |
Isotype | Rabbit IgG |
Immunogen | A synthetic peptide corresponding to a sequence at the N-terminal of human AKT1/2, identical to the related rat and mouse sequence. |
Purity | Immunogen affinity purified. |
Conjugate | Unconjugated |
Species Reactivity | Human, mouse, rat. Not tested in other species. |
Positive Control | Human mammary cancer |
Cellular Localization | Cytoplasmic |
Form | Ready to use solution in PBS with stabilizer and 0.01% sodium azide. No further dilution needed. Serum blocking step should be omitted. |
Storage | Store at 2-8 °C. Do not freeze. |
Applications | IHC-P: Heat induced epitope retrieval (HIER) is required on formalin fixed paraffin embedded sections. IHC-Fr: Not tested. ICC: Not tested. |
Limitations | This product is intended for Research Use Only. Interpretation of the test results is solely the responsibility of the user. |
Precautions | Users should follow general laboratory precautions when handling this product. Wear personal protective equipment to avoid contact with skin and eyes. |
References | 1. Staal SP, Hartley JW, Rowe WP (July 1977). "Isolation of transforming murine leukemia viruses from mice with a high incidence of spontaneous lymphoma". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 74 (7): 3065–7. 2. Staal SP (July 1987). "Molecular cloning of the akt oncogene and its human homologues AKT1 and AKT2: amplification of AKT1 in a primary human gastric adenocarcinoma". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84 (14): 5034–7. 3. Franke, T. F.; Yang, S.-I.; Chan, T. O.; Datta, K.; Kaziauskas, A.; Morrison, D. K.; Kaplan, D. R.; Tsichlis, P. N. : The protein kinase encoded by the Akt proto-oncogene is a target of the PDGF-activated phosphatidylinositol 3-kinase. Cell 81: 727-736, 1995 |
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抗体(Antibody),又称免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称 Ig),是一种由B细胞分泌,被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。
抗体是具有4条多肽链的对称结构,其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链);2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种,重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中,不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈,这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称高变区。高变区位于分子表面,最多由17个氨基酸残基构成,少则只有2 —— 3个。高变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的,位于两臂末端称抗原结合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部称结晶片段(crystalline fragment,FC),糖结合在FC 上。
(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补体,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通过替代途径激活补体。
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,参与免疫应答。
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。
(7)通过与细胞Fc受体结合发挥多种生物效应
①调理作用
IgG、IgM的Fc段与吞噬细胞表面的FcγR、FcμR结合,增强其吞噬能力,通常将抗体促进吞噬细胞吞噬功能的作用称为抗体的调理作用 (opsonization)。
②发挥抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用向左转|向右转
洛斯阿拉莫斯国家实验室(Los Alamos National Laboratory)研究员Andrew Bradbury说:“我们提出,就像基因一样,抗体也应由它们的序列来定义,并且它们应该是在细胞系中重组生成。”
根据编码各种亚基的序列来参考每次检测所用的抗体,它们的浓度和标准化实验缓冲液,可以让全世界的研究人员能够在相同条件下使用具有相同亲和力的抗体。
一种抗体或结合试剂的序列,是该试剂的最终“条形码”,其确保了每个人都能够使用相同的试剂来检测同一目标。导出这一条形码涉及到从体外文库中挑选出一些抗体,或是克隆及测序来自杂交瘤的抗体基因等工作。这将要求对抗体供应的模式作出重大的改变。
抗体是可以帮助机体识别与中和细菌、以及对免疫系统发起的其他攻击的一类特殊蛋白质,科学家们一直利用它们来作为特异的结合试剂。抗体质量控制和精确识别是那些有着序列测定和重组表达需求的研究者们一直努力寻求解决的问题。Bradbury指出,不同于基因、寡核苷酸、质粒、重组蛋白等,抗体是生物学研究中唯一没有在序列水平上进行定义的广泛应用试剂。
研究人员注意到,所有抗体的质量因制造商不同而存在巨大的差异,大多数抗体很少进行验证,批次间差异极为常见。
并且,批量产品附带的证明文件质量同样差异巨大;甚至提供的证明文件往往并不对应提供的批次。
“为了杜绝由于缺乏验证和鉴定所造成的对材料、研究人员时间以及金钱的巨大浪费,必须要根据它们的序列来定义抗体,并且要在标准条件下进行重新生产,”作者们指出。这里的“重新”生产是指采用一些不涉及动物免疫的方法来从头生成抗体或其他结合试剂,而非基于免疫接种生成的克隆抗体。
例如,多克隆抗体的生产是通过将一种蛋白质注射到动物体内,然后提取出响应这一免疫蛋白动物血液中生成并携带着的抗体。各种各样的抗体并非高精度,只有0.5-5%的产物是想得到的抗体,可对初始目标产生反应。其余的都是原本存在于动物血流中的抗体,表明了动物以往的免疫应激。漫无目的地收获如此多错误的抗体,使得生成了一些特异性较差的抗体,由此造成了研究领域的浪费。
“我们建议,借助一种体外方法来生成抗体,这样根本不需要使用动物,重要的是还将直接生成具有已知序列的分子,”Bradbury说。
比如该厂家的WB抗体,如果是1mg/ml的抗体,一般做WB的时候要求抗体工作液的浓度是1ug/ml,也就是说1mg/ml的抗体是可以按照1:1000的比例进行稀释。当然,根据抗体亲和力不同,这个浓度也是可以变化的。所以abcam的WB抗体稀释浓度一般是1ug/ml
免疫荧光(IF)
IHC-P=Immunohistochemistry (Paraffin)
IHC-F=Immunohistochemistry (Frozen)
p代表石蜡切片
f代表冰冻切片

