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请教大家问题：我做的QPCR扩增同一个模板，结果熔融温度分别是74.45，74.17，75.71，75.09，75.21，73.93等，多数在74-75之间，73左右的就一个数值。原来做过用相同的模板扩增，熔融温度是》74《75之间的数值，熔融峰为单峰，且确定是目的基因，不是引物二聚体。并且，相同的标准品时隔一段时间（-80度保存），不同时间做PCR，结果CT值差别较大。有以下的疑问想和大家一起讨论：
1.熔融温度为75,74,73度的样品是否是同一个产物？熔融温度为56度的是不是没有扩增产物？
2.为什么相同的标准品不同反应CT值差别这么大?是不是荧光染料降解?我用的是试剂盒中的扩增酶，还没用几次。
3.扩增曲线的形态是否说明标准品已经有降解？
4.另外，我原来做CDNA梯度稀释做的挺好，可是这个直接是RNA为标准品，我用一步法进行QRT-PCR。标准品梯度稀释线性效果不稳定，有的时候好，有的时候不好。请假大家有没有好的建议？
附件中有扩增曲线和熔融曲线，请大家帮忙分析，谢过了！

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http://www.dojindo.cn/products/C/cfse.htm

经常对对照品与标准品的概念不清楚，有何区别，查了一下，得到如下结果：
对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。
还是感觉不甚明了，是否标准品只用于生物方面？是否化学方面只能称对照品？标准品有什么要求？对照品有什么要求？

From:http://www.cdda.gov.cn/index/zcfg_detail.asp?ID=62a
国家药品标准品、对照品系指国家药品标准中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，它是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；是测量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质标准；在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量必不可少的工具。
目前，中国药品生物制品检定所已能提供各类国家标准物质1242种，其中中药化学对照品288种，对照药材400种，两者占总数的一半以上，

from:http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swfl.htm
国家标准品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的标准物质，其制备与标定应符合“生物制品国家标准物质制备和标定规程”要求，并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作标准品或参考品必须经国家标准品或参考品标化后方能使用。
对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的，可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。

From:http://www.pharm.sdu.edu.cn/peiyang/jiaoan/yaowufenxihx.doc
（3）标准品、对照品：是指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。标准品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，一国际标准品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。
标准品和对照品均附有使用说明书，质量要求，有效期和装量等。

From:http://www.chp.org.cn/2005gs/swfl/swbz.htm
1定义
生物制品标准物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物标准品或生物参考物质。
2标准物质的种类
生物制品标准物质分为二类。
国家生物标准品系指用国际标准品标定的，或我国自行研制的(尚无国际生物标准品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质，其生物活性以国际单位（IU）或以单位（U）表示。
国家生物参考品系指用国际参考品标定的，或我国自行研制的(尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清；或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以（IU）表示。

From:http://www.proteomics.com.cn/msl/papers/Notice1.html
1　对照品与标准品概念不清
对照品与标准品是2个不同的概念，中国药典凡例中已有明确的定义：对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已［1，2］，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如，当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用HPLC或UV法测定时，则用对照品；非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时，用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。
2　对照品或标准品混用
对照品或标准品混用，即将对照品或标准品用于不是其标定方法的含量测定，是药品检验中经常出现但未引起重视的一个问题［3］。尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如英国Glaxo公司提供的头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。虽然中国药典凡例明确规定卫生部所发对照品仅用于正文中所规定的分析方法。但由于：(1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，大多无对照品质量要求及标定方法；(2)对对照品或标准品的正确使用缺乏认识；(3)日常科研中极难找到相应的对照品；(4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。

标准品主要用于比色分析吗？标准品溶解了待测物质的纯水？校准品是个纠正值，什么时候要校准？质控品是已知浓度的标本。好乱，求老师理顺一下。

fitc荧光染料能做流失elisa不好做

“标准品”和“对照品”这两个名称哪个更规范？非常谢谢

各位同盟，有谁在做甲基化的荧光定量PCR吗？小女子有诸多问题求救~~~~

甲基化的荧光定量pcr的标准品是不是用完全甲基化的DNA和完全非甲基化的DNA，具体应该怎么操作啊？

我打算用sybrgreen作为荧光染料。

用相对荧光定量还是用绝对荧光定量呢.......恳请各位指教！

1、不同物品要求含荧光剂量是不一样的。2、“荧光剂作为一种添加剂或者染料等，在具体的使用上有法律规定，不同的用途和产品，规定肯定不一样。”

一、荧光剂又名荧光增白剂，是一种荧光染料，或称为白色染料，也是一种复杂的有机化合物。它的特性是能吸收入射光线产生荧光，使所染物质获得类似荧石的闪闪发光的效应，使肉眼看到的物质很白，达到增白的效果。二、用途介绍1、荧光增白剂BC性能及用途 外观为淡黄色粉末。色光以与标准近似，溶于水呈蓝色荧光，不溶于水杂质含量0.5%,强度为标准品的1005,细度(通过100目筛残余物含量)5%,泛黄点5%,水分含量5%。本品主要用于棉纤维、人造丝、人造棉和纸浆等中性染浴增白处理。2、荧光增白剂JD-3 性能及用途 外观为淡黄色粉末，能溶于热水。本品在中性或微碱性条件下，用于合成洗涤剂、肥皂、造纸和纺织品的增白。3、荧光增白剂挺进31#性能及用途 外观为淡黄色粉末，具有一般二苯乙烯三嗪型增白剂性能。荧光色调为青光，呈阴离子型。可溶于100℃或1000倍25℃水中。水分含量5%，不溶于水的杂质含量0.5%。本品主要用于合成洗涤剂、肥皂、香皂、纸张的增白，也用于棉织物、锦纶、人造丝等的增白，可使被增白物增白发亮。4、荧光增白剂BR（增白剂BL）成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩合物性能及用途 外观为淡黄色粉末，属阴离子型，微带红紫色。2%水溶液澄清，95%以上通过60目筛。5、荧光增白剂EBF成 分 邻氨基苯酚与2，5-二羧酸噻吩的缩合物性能及用途 外观为细微黄白色悬浮液。有鲜艳的蓝色荧光。含有效荧光物质10%，属非离子型，呈中性，可与水以任何比例稀释分散。耐硬水、耐酸、耐碱、耐晒，氧化漂白稳定。增白强度与标准品相似，能与大多数施用于白色织物的整理剂和染色载体共用。酸碱度为10g/L，分散液pH6。本品主要用于涤纶、锦纶和醋纤的增白，也可用于合纤与棉、毛混纺织物的增白。6、荧光增白剂R成 分 DSD酸钠盐与异氰酸苯酯的缩俣物性能及用途 外观为白色至淡黄色粉末。阴离子型。95%以上通过60目筛。0.2%水溶液澄清。本品主要用于纤维、纸张、白地印染增白和浅色纤维增艳。7、 荧光增白剂AD（荧光增白剂CA）成 分 对氯代--吗啉基丙酰苯盐酸盐与对甲磺酰苯肼盐酸盐的缩合性能及用途 外观为带绿光的淡黄色细针状结晶。本品主要用作合成纤维的增白剂。8、荧光增白剂ER（增白剂PS-1）性能及用途 强度为标准品的1003，色光与标准品近似，非离子型，在水中均匀分散。本品用于涤纶、涤/棉混纺织物的增白。用其处理的织物白度高、色光纯。具有优异的耐洗、耐晒和耐升华牢度。二、实验证明（1）对皮肤无刺激经过多年的动物及人体试验表明：即使是皮肤直接接触荧光增白剂CBS纯品，对皮肤也无刺激性，不会导致皮肤过敏。沈永嘉教授等编写的《荧光增白剂》一书中指出：荧光增白剂不会被皮肤吸收。即使荧光增白剂CBS在使用过程中可能有少量粘附在皮肤上，也不会和人体皮肤发生反应，而且通过日常的洗涤活动（例如洗手、洗澡等）很容易被完全的洗掉，不会经皮吸收[1] 。因此，皮肤直接与添加CBS的洗衣液接触不会造成伤害。（2）对伤口愈合无不良影响发表于1994年《德国皮肤病学》杂志上的《荧光增白剂的毒理学性质》一文中指出，即使是用含有荧光增白剂的纺织材料直接接触伤口，也不会对伤口愈合产生不良影响，且不会对人体皮肤造成病理性变化。（3）代谢：荧光增白剂CBS是水溶性的，通过正常代谢可很快完全排出体外德国Georg Thieme出版社出版的《环境质量和安全》增补第四卷《荧光增白剂》（`Environmental Quality and Safety` Supplement Volume IV `Fluorescent Whitening Agents`）一书中指出，通过小鼠代谢研究表明，在大剂量喂食洗涤剂用荧光增白剂CBS后，绝大部分增白剂都会迅速通过肠道排出，不被肠道吸收。其血、肝、肾、脑、肌肉和脂肪中均无荧光增白剂残留，即不会造成体内蓄积。所以日常生活中即使有少量荧光增白剂CBS进入人体，也会通过正常代谢过程很快排出体外。（4）荧光增白剂CBS无致畸性，无致癌性通过对多种动物的急性毒性研究和长达两年的小鼠慢性毒理实验研究证明：CBS属于无毒性物质，无致畸、无致癌、无致突变性。三、结论总之，在正常使用剂量下，含有荧光剂都是安全的。参考资料荧光剂：https://baike.baidu.com/item/%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%89%82/6185591?fr=aladdin#2

我是一个新手，请问大家我现在在做基因工程药物DSPA的纯度检测，参照药典三部生化药物的检测方法，所用的液相是waters2489监测器，717进样器所用的流动相是A:0.1％TFA-水，B:.1％TFA-ACN，梯度洗脱5％－70％50分钟，由于dspa的研制处于临床阶段，没有标准品做对照，不知道用什么方法来确定哪个吸收峰是目的蛋白的峰，请各位高手给我指点一下。

没图片
既说像坐标画曲线曲线应纵轴该荧光强度吧轴数值变化代表荧光强度变化荧光强度变化代表钙离浓度变化 我觉直接用荧光强度值变化代替钙离浓度变化研究意义该钙离浓度变化吧

非要荧光强度值换算钙离浓度需要做列工作
1 取标准钙离浓度染色用共聚焦显微镜测荧光强度
2 标准品需要同像环境主要曝光间相同激光波及能量
3 标准品要用同浓度荧光染料
才能根据标准荧光强度关系推算品钙离浓度

请教一下大家，这些生化厂商，他们的生化检测项目，各项目分别溯源到什么标准品或者什么参考方法？写一份资料急用，请大家赐教，谢谢。可以贴上来，提供可靠的出处链接更佳。以前出去开会到处都是这些宣传资料，拿了......

荧光染料按照化学架构分属于什么染料
这些染料的结构式基本是保密的。有些地方能查到,象维基上就有SYBR Green的结果式,但谁也不能肯定是否是正确的。