【求助】FITC标记山羊抗小鼠IgG的浓度和时间
2021-08-19
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1982王元
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是其他步骤出问题了吧,二抗一般反应半小时就够了
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wh2008
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snowmaia各位同胞好,最近做免疫组化买了中杉的“FITC标记山羊抗小鼠IgG”二抗,说明书看的糊涂,做了一次组化,浓度是1:100,PBS稀释,时间25分,可是结果是阴性,什么都没有,突然觉得这个荧光素标记二抗是不是不能用DAB显色啊你的问题有点与你标题不一致,且信息提供不够,目前分析如下:1、荧光素标记二抗孵育后,用PBS浸洗后直接封片,即可在荧光显微镜下观察结果。2、而DAB显色是酶免疫组化中的步骤,需要与过氧化物酶POD及过氧化氢一起进行反应,其中过氧化物酶一般是标记在二抗或三抗上的,而二抗与一抗进行反应——一抗与组织中抗原进行反应。3、排除以上原因后,可能考虑一抗和二抗最佳稀释度的摸索和孵育时间的调整。
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snowmaia
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谢谢各位喽,最后发现是二抗错了,做的是酶免疫组化,买的是荧光法的二抗,难怪不出结果,(*^__^*)嘻嘻……,惭愧哦
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