Overview:
ASK1,alsoknownasMAPKKK5,activatesMKK3,MKK4(SEK1),andMKK6.OverexpressionofASK1inducesapoptoticcelldeath,andASK1isactivatedincellstreatedwithtumornecrosisfactor-alpha(1).ASK1interactswithmembersoftheTRAFfamilyandisactivatedbyTRAF2intheTNF-signalingpathway.AfteractivationbyTRAF2,ASK1activatesMKK4,whichinturnactivatesJNK.Thus,ASK1isamediatorofTRAF2-inducedJNKactivation(2).
References:
1.Smith,C.Ichijo,H.etal:InductionofapoptosisbyASK1,amammalianMAPKKKthatactivatesSAPK/JNKandp38signalingpathways.Science275:90-94,1997.2.Nishitoh,H.etal:ASK1isessentialforJNK/SAPKactivationbyTRAF2.Molec.Cell2:389-395,1998.
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不知道能不能直接买到大鼠抗豚鼠血管IgG的ELISA试剂盒。
如果买不到这种试剂盒,用空白板的话(就是反应孔中没有抗原或者抗体包被),把自制的豚鼠血管抗原加到反应孔中进行孵育,能不能使抗原附着在孔壁上?这样的话就可以按照elisa的操作步骤进行大鼠血清检测了。
目前的设想是自制抗原,粉碎豚鼠的血管,制成悬液,通过反复多次的冻融,离心后收集上清液作为抗原(即豚鼠血管抗原)。
然后将抗原加入到elisa的反应孔中(这种是特制的空白板,就是反应孔中没有抗原或抗体包被)进行孵育,使豚鼠血管抗原附着在孔壁上,就是让反应孔充当固相载体,形成固相抗原。倒掉多余的抗原。
再加入待检测的大鼠血清,这样血清中的特异性抗豚鼠血管IgG就可以跟固相的抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。
加入酶标的兔抗鼠或者羊抗鼠IgG,形成酶标的抗原抗体复合物。
然后就是一些显色步骤。
现在关键的问题就是抗原加入空白板,能不能形成固相抗原,如果不能跟孔壁附着的话,在后面洗涤的过程中就被洗掉了,那就没办法完成检测了。
请各位大侠给指条明路啊!!!小弟在此多谢了!!!
多谢!

