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Jackson/ChromPure Sheep IgG, whole molecule/10.0 mg/013-000-003
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Information ChromPure is our trade name for highly purified proteins from the serum of non-immunized animals.Usage Physical State: Sterile-filtered liquid
Storage: Store at 2-8°C under sterile conditions. Prepare working dilution on day of use. Expiration date: one year from date of receipt. The expiration date may be extended if test results are acceptable for the intended use.
Purity:Based on immunoelectrophoresis at an antigen concentration of 20 mg/ml, the pattern of precipitation against rabbit anti-sheep whole serum is the same as that against rabbit anti-sheep IgG, Fc fragment specific. Preservative:None Images & ReferencesThis product is for in vitro research use only. It is not a medical device and it is not intended for diagnostic or therapeutic purposes.
Jackson总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特，距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学，蛋白质化学，微生物学，免疫学及产品开发实验研究。我们的目标是为世界各地的研究者能最大选择的提供最高质量的科学试剂以及最棒的技术支持和售后服务。蚂蚁淘向您提醒的是，Jackson产品仅用于研究，不用于诊断或治疗用途。作为美国著名的各种二抗生产公司之一，Jackson在全世界各国设有几十家代理。由于其产品效价高、种类全、价格低廉，因而成为全球各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的首选。其产品主要包括：各种纯化的二抗、标记的二抗（AMCA、Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记）、金标试剂等。
Jackson二抗产品选购简介
为便于客户选购Jackson公司的各种二抗，特将选购时的注意事项摘译如下：
1、确定所需的抗体是“整个IgG抗体分子”还是抗体分子的F（ab"）片段或Fab片断。
2、在抗体描述（AntibodyDescription）一栏选择针对所需检测的一抗的种属、选择所需的二抗的种属来源、选择所需二抗的特异性、选择所需标记物标记的二抗。
依据Jackson公司的质检，来源于不同种属的抗同一抗原的抗体在品质上无差异。关于抗体种属的选择，除非有必要，一般不选择针对相关种属的免疫球蛋白吸收过的抗体，因为同时也会去除一些与所吸收的抗体具有相似同源性的某些亚类，造成不会与一抗的所有亚类反应。针对某一种属的抗体可能会和其他一些种属有交叉反应。牛血清白蛋白和奶粉可能含有与抗牛IgG、抗山羊IgG、抗马IgG、抗绵羊IgG等抗体反应的IgG，因此如果使用它们作为封闭液或抗体稀释液的成分，会增加背景染色和降低抗体的效价。
JacksonImmunoResearch的抗体产品线完全，有全球最大的二抗产品库，能提供多种应用类型和需要的二抗产品，其二抗产品本身也具有极高的产品质量和稳定性。以上述产品为例，其HRP酶标山羊抗小鼠二抗，WB实验的应用稀释比率为1:10000-1:200000，也就是说，购买的2ml二抗，实际应用时相当于20L-400L的最终使用液。另外，一次购买大包装，避免了不同批次之前的差异，降低了实验条件本身的误差。作为多家著名品牌的代理商，蚂蚁淘根据国内科研的现实需求，为客户选择最具性价比的二抗及血清产品免疫学解决方案。如果您对Jackson的产品感兴趣，请致电027-84454412到蚂蚁淘科技有限公司问询您所感兴趣的产品类型。
JacksonImmunoResearchLaboratories,INC.专业致力于亲和纯化的二抗和免疫球蛋白的生产及偶联。产品主要销往世界各地的大学和科研院所。该公司位于宾夕法尼亚州费城以西约40英里，始建于1982年，经过40年左右的发展，Jackson的二抗以种类丰富（物种齐全，标记多样，应用广泛）、性价比高、供货迅捷而受到更多科研学者和工业客户的青睐。
Jackson的产品主要有酶标二抗、荧光标记二抗、生物素标记二抗、胶体金标记二抗、封闭血清等等，其中JacksonHRP标记羊抗兔/羊抗鼠二抗，更是很多生产厂家的重要物料之一。苏州蚂蚁淘生物科技有限公司作为Jackson在中国的代理商，备有大量二抗现货，并能提供专业的售前咨询和完善的售后服务。
JacksonImmunoResearchLaboratories,INC.专业致力于亲和纯化的二抗和免疫球蛋白的生产及偶联。产品主要销往世界各地的大学和科研院所。该公司位于宾夕法尼亚州费城以西约40英里，始建于1982年，经过40年左右的发展，Jackson二抗以种类丰富（物种齐全，标记多样，应用广泛）、性价比高、供货迅捷而受到更多科研学者和工业客户的青睐。
Jackson的所有产品均具有极高的纯度和高超的品质，大部分二抗产品以冻干粉形式存在，易于保存和运输；作为二抗的实际生产商（非OEM商），产品的性价比也是非常高的，很多大厂家诸如T.F等也会从JacksonOEM产品。另外厂家完善的库存和供应体系以及高效稳定的纯化技术，保证了大部分二抗产品均能现货形式供应，不同批次的产品质量的稳定性也非常高。
Jackson的产品主要有酶标二抗、荧光标记二抗、生物素标记二抗、胶体金标记二抗、封闭血清等等，其中JacksonHRP标记羊抗兔/羊抗鼠二抗，更是很多生产厂家的重要物料之一。苏州蚂蚁淘生物科技有限公司作为Jackson在中国代理商，备有大量二抗现货，并能提供专业的售前咨询和完善的售后服务。
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-09-21
1。根据序列比对，相似性分析，初步估计蛋白质可能的功能2。查阅文献，看有否相关研究3。如果用血清，在未知功能情况下，很难有所作为，建议等初步知道功能后，用血清是验证抉具体作用的4。比较常用的未知基因分析方法，是从基因水平入手：将该基因敲除(现在可以考虑RNAi)，看看在功能组、蛋白 查看更多
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2021-09-20
丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法……1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度 查看更多
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2021-09-06
人造纤维的一个类别，指由从牛奶、大豆、花生、玉米等自然物中提取到的蛋白质为原料，溶解于适当溶剂中所制得的纤维。该纤维在20世纪30年代开始实现工业化生产，随着众多合成纤维的问世，相继停止生产。由于该纤维手感柔软，穿着舒适；进入90年代以来，又有生产者开始从牛奶中提取乳酪蛋白... 查看更多
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2021-09-10
牛血清蛋白(V)第五组分是个什么概念？ 查看更多
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2021-09-03
血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物。可利用不同的方法将其分离。血浆中的白蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原，凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。γ球蛋白主要来自浆细胞。当肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检... 查看更多
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2021-09-18
到目前为止，蛋白质结构解析的方法主要是两种，x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法，叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更早，也更加的成熟，解析的数量也更多，我们知道，第一个解析的蛋白的结构，就是用x晶体衍射的方法解析的。而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起来的。这 查看更多
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2021-09-09
制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础，抗体质量的高低将直接影响试验的成败。 通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白混杂在一起，为了获得成分相对单一的抗体或将抗体用于特定的用途，就需要进行抗体纯化。从成分的角度分析, 抗体分子是一类蛋白质分子，与其他蛋白质一样... 查看更多
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2021-09-01
TonkBio品牌试剂盒有哪些？全在这里了 查看更多
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2021-09-13
在经典的Western Blot的世界里，蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣，构成WB完整过程，就象砌积木一样，少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友，告诉我，你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时，有没有设想过能省略掉其中的某个费时的非必需步骤 查看更多
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2021-09-04
燕麦蛋白质是以天然优质燕麦蛋白为原料，运用生物酶技术研发的护肤、洁肤专用的活性蛋白。燕麦富含丰富的营养活性成分，主要是燕麦膳食纤维、燕麦β-葡萄糖、燕麦蛋白质、燕麦抗氧化物质及燕麦脂肪等。目前，国内对燕麦膳食纤维、燕麦β-葡萄糖、燕麦抗氧化物质及燕麦脂肪已经进行了广泛的... 查看更多
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2021-09-17
解离/非解离native缓冲液系统很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳（zone electrophoresis）的研究使用一种缓冲液系统，该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠（SDS）,一种离子型去污剂，它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量的SDS和巯基 查看更多
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2021-09-07
血清铁蛋白（serum ferritin，SF）是去铁蛋白和铁核心Fe3 形成的复合物，是铁的贮存形式，它是判断机体是否缺铁或铁负荷过多的有效指标。... 查看更多
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血清蛋白_用途_结构式_性质_血清蛋白CAS号【68551064】_123
血刺江湖丶宅a2018-02-01
人血清白蛋白是由585个氨基酸组成的单链蛋白质，分子量为67kDa。成熟的人血清白蛋白是一个心形分子，由3个结构相似的α-螺旋结构域组成。向左转|向右转
【资源】人血清抗胰蛋白酶(α1AT)的分离纯化及鉴定 蛋白质和糖学...123
tansheng2112012-11-20
【目的要求】1.掌握α1-AT分离纯化各步骤原理、操作及鉴定方法2.掌握基本技术操作及仪器使用3.熟悉人血清蛋白质的分类方法,α1-AT性质4.了解生物大分子制备技术,分离纯化类型5.学会利用学过的分离纯化方法进行基本的科研设计6.练习研究论文基本写作
【教学内容一】分段盐析法，凝胶过滤法(盐析法概念及原理，分段盐析概念，分子筛效应，柱层析基本技术)
【实验原理】1.盐析法是一种利用蛋白质在高盐溶液中溶解度不同而分离的方法。通过将硫酸铵加入蛋白质溶液中，使蛋白质表面电荷被中和，水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。2.通过分段改变盐类浓度达到分离目的的方法叫分段盐析法。3.凝胶过滤又称分子筛层析。混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙先被洗脱(阻力小,流程短,流速大),分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞,流速缓慢,流程长而后被洗脱,由于流速不同可以把大小不同的分子分开.
【仪器与试剂】1.离心机2.真空泵3.饱和硫酸铵溶液：称取767g固体硫酸铵，加入1000ml水中，加热使之溶解，室温冷却后4℃静置过夜，然后用氨水将pH调至中性。4.固体(NH4)2SO45.SephadexG—256.奈氏试剂7.双缩脲试剂8.pH7.4,0.05MPBS
【步骤】
一分段盐析
1.观看人血清抗胰蛋白酶(α1-AT)的分离及鉴定教学录像2.每组量取20ml血清，倒入一干净烧杯中，缓慢加入饱和硫酸铵20ml，边加边搅拌,放入4℃冰箱30分钟3.从冰箱中取出烧杯，将血清倒入离心管，3000rpm，离心20分钟4.将上清倒入一干净量筒中，记录体积后，倒入干净烧杯中，按17.6g/100ml量取固体硫酸铵，缓慢加入上清中，边加边搅拌。4℃冰箱放置30分钟5.将烧杯中液体倒入抽滤器中，负压抽滤6.刮下滤纸上的粗提蛋白，用4ml缓冲液溶解，准备加样
二凝胶过滤层析
1.凝胶柱准备：(1)连接层析柱(2)夹住出口，加入1/3体积的0.05MpH6.4PBS，灌胶，待凝胶自然沉降约1cm时，打开出口，控制流速，60滴/分(3)层析柱填装完成后，连接下口瓶，调节流速，使入口和出口流速相同。平衡至入口pH值与出口pH值相同(即pH试纸呈色相同)，关闭出口，等待加样2.加样：用吸管吸去胶面以上的缓冲液，立即加入蛋白粗提液(沿管壁缓慢加入)3.打开出口，调流速15滴/分，待蛋白粗提液完全进入胶面，用少量缓冲液清洗管壁。连接下口瓶4.检测：用双缩脲试剂检测洗脱液。待试剂变红，开始收集，直到试剂不变色停止收集。测量并记录收集液的体积，留取1ml样品(标记为G—25样品)，放入一冷冻管中冰箱冻存;剩余的液体收集入一大试管中，作好标记，下次实验用5.洗去铵盐：全速洗脱，用奈氏试剂检测洗脱液，直到橙色消失为止，回收凝胶
【注意事项】1.盐析所用器皿一定要干燥2.盐析时，应将饱和硫酸铵或固体硫酸铵加入到血清中，且边加边搅拌3.层析柱上方要留有少量液体，避免使凝胶暴露于空气中4.凝胶过滤上样时，使样品沿管壁缓缓流下，勿冲破胶面
（信息提供：探生网生物医药）
【教学内容一】分段盐析法，凝胶过滤法(盐析法概念及原理，分段盐析概念，分子筛效应，柱层析基本技术)
【实验原理】1.盐析法是一种利用蛋白质在高盐溶液中溶解度不同而分离的方法。通过将硫酸铵加入蛋白质溶液中，使蛋白质表面电荷被中和，水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。2.通过分段改变盐类浓度达到分离目的的方法叫分段盐析法。3.凝胶过滤又称分子筛层析。混合物随流动相流经装有凝胶作为固定相的层析柱时，分子量大的物质因不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的空隙先被洗脱(阻力小,流程短,流速大),分子量小的物质因能进入凝胶网孔而受阻滞,流速缓慢,流程长而后被洗脱,由于流速不同可以把大小不同的分子分开.
【仪器与试剂】1.离心机2.真空泵3.饱和硫酸铵溶液：称取767g固体硫酸铵，加入1000ml水中，加热使之溶解，室温冷却后4℃静置过夜，然后用氨水将pH调至中性。4.固体(NH4)2SO45.SephadexG—256.奈氏试剂7.双缩脲试剂8.pH7.4,0.05MPBS
【步骤】
一分段盐析
1.观看人血清抗胰蛋白酶(α1-AT)的分离及鉴定教学录像2.每组量取20ml血清，倒入一干净烧杯中，缓慢加入饱和硫酸铵20ml，边加边搅拌,放入4℃冰箱30分钟3.从冰箱中取出烧杯，将血清倒入离心管，3000rpm，离心20分钟4.将上清倒入一干净量筒中，记录体积后，倒入干净烧杯中，按17.6g/100ml量取固体硫酸铵，缓慢加入上清中，边加边搅拌。4℃冰箱放置30分钟5.将烧杯中液体倒入抽滤器中，负压抽滤6.刮下滤纸上的粗提蛋白，用4ml缓冲液溶解，准备加样
二凝胶过滤层析
1.凝胶柱准备：(1)连接层析柱(2)夹住出口，加入1/3体积的0.05MpH6.4PBS，灌胶，待凝胶自然沉降约1cm时，打开出口，控制流速，60滴/分(3)层析柱填装完成后，连接下口瓶，调节流速，使入口和出口流速相同。平衡至入口pH值与出口pH值相同(即pH试纸呈色相同)，关闭出口，等待加样2.加样：用吸管吸去胶面以上的缓冲液，立即加入蛋白粗提液(沿管壁缓慢加入)3.打开出口，调流速15滴/分，待蛋白粗提液完全进入胶面，用少量缓冲液清洗管壁。连接下口瓶4.检测：用双缩脲试剂检测洗脱液。待试剂变红，开始收集，直到试剂不变色停止收集。测量并记录收集液的体积，留取1ml样品(标记为G—25样品)，放入一冷冻管中冰箱冻存;剩余的液体收集入一大试管中，作好标记，下次实验用5.洗去铵盐：全速洗脱，用奈氏试剂检测洗脱液，直到橙色消失为止，回收凝胶
【注意事项】1.盐析所用器皿一定要干燥2.盐析时，应将饱和硫酸铵或固体硫酸铵加入到血清中，且边加边搅拌3.层析柱上方要留有少量液体，避免使凝胶暴露于空气中4.凝胶过滤上样时，使样品沿管壁缓缓流下，勿冲破胶面
（信息提供：探生网生物医药）
抗体亲和纯化洗脱液的应用123
hbgaoyifu2021-08-13
芯片生化反应概述.pdf123
晚安8642021-07-31
一般认为血清白蛋白的正常值为40-55g/L，血清球蛋白为20-30g/L，血清总蛋白的正常值为60-80g/L，白球比的正常值为1.5-2.5。向左转|向右转
血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定 123
2021-08-20
好难问题太笼统了
一文教你如何保存纯化后的蛋白质?123
Scomilo72021-08-11
保存方法如下：
1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中。
2.添加50%甘油冷冻，尤其适用于酶类。
3.如果样品要用于生物学检测，避免使用防腐剂。在体内实验中不能添加防腐剂，而应当将样品分装成小份冷冻。
4.可使用无菌滤器以延长保存时间。
5.添加稳定剂，如甘油（5-20%）、血清白蛋白（10mg/ml）、配基（浓度取决于活性蛋白的浓度）以帮助维持生物活性。
6.避免反复冻融或冻干重溶解过程，这样很可能会降低生物活性。
7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来，包括一些小鼠IgG3亚族的抗体，不能保存在4度冰箱中，可添加防腐剂保存在室温中。
1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中。
2.添加50%甘油冷冻，尤其适用于酶类。
3.如果样品要用于生物学检测，避免使用防腐剂。在体内实验中不能添加防腐剂，而应当将样品分装成小份冷冻。
4.可使用无菌滤器以延长保存时间。
5.添加稳定剂，如甘油（5-20%）、血清白蛋白（10mg/ml）、配基（浓度取决于活性蛋白的浓度）以帮助维持生物活性。
6.避免反复冻融或冻干重溶解过程，这样很可能会降低生物活性。
7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来，包括一些小鼠IgG3亚族的抗体，不能保存在4度冰箱中，可添加防腐剂保存在室温中。
可溶性蛋白的纯化方法...详细的,我的用的无血清培养基,带His标签,问...123
qweqwe213222021-08-17
用镍柱镍柱分离纯化
固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。
金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。
全部容量：24-30um的含有zn的干胶
柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖
柱料大小：45-165um
平均微粒：90um
直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米
最大压强：0.3MPa
PH变化：长期3-13
短期2-14
化学稳定：通用含水缓冲液
0.01M盐酸，1.0M NAOH,20%乙醇（保存7天）
物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化
耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时
金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。
处理金属螯和柱料：
1 平衡所有用到的材料于室温。
2 搅拌金属螯和柱料
3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。
4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。
5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连接上泵。
6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。
7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱床。
使用adaptor
1 经过上溯填鸭后，关闭柱床下面开关，移开上面的薄膜，小心的加上去离子水进行液封。
2 一定角度插入adaptor，确保没有气泡。
3 确保所有的连接都没有问题，柱子/泵/样品接受器
4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。
5 固定adaptor，打开柱子开关，开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。
固定金属离子：
金属螯和柱料通过水来螯和金属的，避免发生沉淀在胶上。
1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床（去离子水）
2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好，避免形成沉淀和共沉。
3 加入一倍柱床的金属离子溶液
45倍柱床的去离子水洗涤
5至少2倍柱床的平衡缓冲液
结合：
发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后
初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐
最通用缓冲液：
0.01-0.2M磷酸钠
0.05M乙酸钠
强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。
通常如果不知道一个蛋白的结合能力，最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐，同时含有0.15-0.5M NaCl
去垢剂不会影响蛋白质的结合能力
金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定
洗脱蛋白：（3种方法）
1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐，磷酸或者乙酸盐。
2 逐步提高咪唑的浓度（0-0.5M），梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。
3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。
利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白
通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白，然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。
以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料，然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时，这些方法也是很好用的。
为了获得高纯度的蛋白，必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱，然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。
为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质，（包含体），可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。
样品处理：
样品要经可能溶解，避免出现堵塞现象，所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志
如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必须调整PH到7－8。
上柱前准备：
洗柱料：
1 亲柔震动胶瓶充旋胶料
2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白
3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
4 小心去除上清
5 加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。
6 再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
7 再次小心去除上清
挂镍：
1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。
2500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3小心去除上清
洗柱：
1加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料，来回倒置5分钟
2500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3小心去除上清
4 再洗两次柱料（一共3×5柱床去离子水）
5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）
利用离心来纯化：
上样：
1 在起始缓冲液中加入样品，然后使整体胶浓度达到50％
2 亲柔搅拌，室温离心5－30分钟，结合能力取决于蛋白和样品浓度。
3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
洗胶：
1 加入5倍体积起始缓冲液，搅拌5分钟
2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
4再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱：
1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟
2再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
利用流速和重力纯化：
1 在柱子底部加上滤器
2 加水排气
3 加柱帽，去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了
样品结合：
1 倒胶进入柱子
2 小心上样，用波棒室温搅拌5－30分钟
3 打开柱帽，收集流出峰用于分析
洗胶：
1 加入5倍体积起始缓冲液，收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳
2再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱：
1 加上柱帽，加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟。打开柱帽，收集流出峰
2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5
常见问题：
1 样品太粘稠
答：核酸存在影响，可以继续超声，加入RNA酶至10ug/mlDNA酶至5ug/ml。然后冰浴1
0－15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。
2 平衡时样品洗脱了下来
答: 检查PH和缓冲液成分，如果缓冲液成分不正确，EDTA加入，强还原剂加入，都会导致这个现象出现。
加大胶的量，如果胶料承载能力过头，也绘出出现这现象。
准备新鲜的柱料，如果柱料断裂，也挂不上蛋白。
3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白
答：如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中
超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。（通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免发泡以降解融合蛋白。
蛋白可能是是包含体，可以使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解。
尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，必须换缓冲液。
洗脱液浓度太稀，可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白，证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高，可适当降低。
4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带
答：加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。
在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力，可以改变缓冲液来洗脱。
如果杂志和目的蛋白有相同结合能力，那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B
柱料再生，清洁和保存
柱料再生：
1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA
2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜
3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白
清洗柱料：
1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脱10－15分钟
2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白
3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗
4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。
也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1－2小时。最后用5个柱床的70％乙醇去除去垢剂。
清洁：
1 尽可能去除微生物
2 0.5-1M NaOH反向流动半小时
3 再用3－5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡
4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力
保存：
长期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度
固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。
金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。
全部容量：24-30um的含有zn的干胶
柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖
柱料大小：45-165um
平均微粒：90um
直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米
最大压强：0.3MPa
PH变化：长期3-13
短期2-14
化学稳定：通用含水缓冲液
0.01M盐酸，1.0M NAOH,20%乙醇（保存7天）
物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化
耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时
金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。
处理金属螯和柱料：
1 平衡所有用到的材料于室温。
2 搅拌金属螯和柱料
3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。
4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。
5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连接上泵。
6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。
7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱床。
使用adaptor
1 经过上溯填鸭后，关闭柱床下面开关，移开上面的薄膜，小心的加上去离子水进行液封。
2 一定角度插入adaptor，确保没有气泡。
3 确保所有的连接都没有问题，柱子/泵/样品接受器
4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。
5 固定adaptor，打开柱子开关，开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。
固定金属离子：
金属螯和柱料通过水来螯和金属的，避免发生沉淀在胶上。
1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床（去离子水）
2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好，避免形成沉淀和共沉。
3 加入一倍柱床的金属离子溶液
45倍柱床的去离子水洗涤
5至少2倍柱床的平衡缓冲液
结合：
发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后
初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐
最通用缓冲液：
0.01-0.2M磷酸钠
0.05M乙酸钠
强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。
通常如果不知道一个蛋白的结合能力，最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐，同时含有0.15-0.5M NaCl
去垢剂不会影响蛋白质的结合能力
金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定
洗脱蛋白：（3种方法）
1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐，磷酸或者乙酸盐。
2 逐步提高咪唑的浓度（0-0.5M），梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。
3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。
利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白
通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白，然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。
以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料，然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时，这些方法也是很好用的。
为了获得高纯度的蛋白，必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱，然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。
为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质，（包含体），可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。
样品处理：
样品要经可能溶解，避免出现堵塞现象，所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志
如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必须调整PH到7－8。
上柱前准备：
洗柱料：
1 亲柔震动胶瓶充旋胶料
2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白
3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
4 小心去除上清
5 加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。
6 再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
7 再次小心去除上清
挂镍：
1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。
2500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3小心去除上清
洗柱：
1加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料，来回倒置5分钟
2500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3小心去除上清
4 再洗两次柱料（一共3×5柱床去离子水）
5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）
利用离心来纯化：
上样：
1 在起始缓冲液中加入样品，然后使整体胶浓度达到50％
2 亲柔搅拌，室温离心5－30分钟，结合能力取决于蛋白和样品浓度。
3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
洗胶：
1 加入5倍体积起始缓冲液，搅拌5分钟
2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
4再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱：
1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟
2再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。
3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
利用流速和重力纯化：
1 在柱子底部加上滤器
2 加水排气
3 加柱帽，去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了
样品结合：
1 倒胶进入柱子
2 小心上样，用波棒室温搅拌5－30分钟
3 打开柱帽，收集流出峰用于分析
洗胶：
1 加入5倍体积起始缓冲液，收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳
2再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱：
1 加上柱帽，加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟。打开柱帽，收集流出峰
2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN
注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5
常见问题：
1 样品太粘稠
答：核酸存在影响，可以继续超声，加入RNA酶至10ug/mlDNA酶至5ug/ml。然后冰浴1
0－15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。
2 平衡时样品洗脱了下来
答: 检查PH和缓冲液成分，如果缓冲液成分不正确，EDTA加入，强还原剂加入，都会导致这个现象出现。
加大胶的量，如果胶料承载能力过头，也绘出出现这现象。
准备新鲜的柱料，如果柱料断裂，也挂不上蛋白。
3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白
答：如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中
超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。（通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免发泡以降解融合蛋白。
蛋白可能是是包含体，可以使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解。
尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，必须换缓冲液。
洗脱液浓度太稀，可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白，证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高，可适当降低。
4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带
答：加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。
在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力，可以改变缓冲液来洗脱。
如果杂志和目的蛋白有相同结合能力，那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B
柱料再生，清洁和保存
柱料再生：
1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA
2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜
3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白
清洗柱料：
1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脱10－15分钟
2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白
3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗
4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。
也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1－2小时。最后用5个柱床的70％乙醇去除去垢剂。
清洁：
1 尽可能去除微生物
2 0.5-1M NaOH反向流动半小时
3 再用3－5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡
4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力
保存：
长期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度
血清蛋白 123
2018-02-01
有。
血清为去除纤维蛋白原后的无形成分，颜色微黄，透亮。
血清的基本成分是水，水中溶有蛋白质、脂肪、糖、无机盐、维生素等营养成分，也溶有人体代谢产物。血清中有抗体，这是被称作免疫球蛋白的蛋白质。
血清为去除纤维蛋白原后的无形成分，颜色微黄，透亮。
血清的基本成分是水，水中溶有蛋白质、脂肪、糖、无机盐、维生素等营养成分，也溶有人体代谢产物。血清中有抗体，这是被称作免疫球蛋白的蛋白质。
实验求助~~原代脂肪细胞培养 细胞生物学论坛123
liuyunyi2007-04-05
我想做关于血清铁蛋白的电泳，首先要分离和纯化铁蛋白。请各位老师和学长指点。
蛋白质的分离纯化方法123
哲宇丶01962021-08-16
一.血清ǐ-球蛋白的初步提取
1. 血细胞与血清分离：
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).
2. 乳糜粒分离：4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心
梯度液配置：离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用.
3. 血清蛋白分离：除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质.
1. 血细胞与血清分离：
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).
2. 乳糜粒分离：4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心
梯度液配置：离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用.
3. 血清蛋白分离：除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质.
血清总蛋白偏高是什么原因引起的_有问必答_123
蔷薇几度花01632021-07-21
我们所说的血清总蛋白，主要反映肝脏合成功能和肾病造成的蛋白丢失的情况，血清总蛋白检查结果偏高并没有什么太大的临床意义的，因为它的分类中白蛋白以及球蛋白是没有什么问题的，你可以注意休息，保持心情舒畅，饮食清淡规律即可.
血清免疫球蛋白G的分离纯化及鉴定 123
断鸭鸭2021-08-09
血清免疫蛋白的纯化为什么要检测柱子流出的液体是否有铵根
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