DNA聚合反应需要的原料及操作的方法步骤
在PCR技术中的DNA聚合酶要进行DNA聚合反应时一定要有引子（primer），因为它只能以引子所提供的3-OH为起始点进行延伸（extension）的工作，而不能就地重新合成新的DNA（Denovosynthesis）。一般实验常以人工合成的寡核苷酸为引子进行DNA聚合反应，这时固然可以根据已知序列设计核酸引子，但也可以采用逢机引子（randomprimers）。所谓逢机引子即其序列为逢机序列，不经特别设计，目前应用最广者是以自动化机器所合成的、六到八个核苷酸长的寡核苷酸混合物；反应进行中若有任何一条逢机引子结合到模版DNA，即可引导DNA聚合反应的进行。以randompriming方法进行核酸标定，是以逢机引子引导Klenowfragment（largefragmentofE.coliDNApolymeraseI）进行DNA聚合反应，并在反应过程中添加[α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP等标定物质。而为了避免randompriming也发生于载体部份的DNA，最好不要直接以质体DNA为模版进行标定反应，而应预先将目标DNA自载体切除出来。
仪器用具：微量离心机；沸水浴及冰浴
药品试剂：
模版DNA（pBlueGus的BamHI-HindIIIDNA片段，将由助教提供）
0.2MEDTA,pH8.0
4MLiCl
Randomprimingkit（Roche）：
Hexanucleotidemix（randomprimer）
dNTPmixture（1mMdATP,1mMdCTP,1mMdGTP,0.65mMdTTP,0.35
mMDIG-11-dUTP,pH7.5）
Klenowenzyme（2U/μL）
绝对酒精
70%酒精
TE（10mMTris-Cl,pH8.0;1mMEDTA）
方法步骤：
◆以下反应条件与步骤主要参照randomprimingkit制造厂商所提供的产品说明书。
1）取100ng模版DNA,加入适量去离子水，把体积补足为15μL.
2）于沸水中加热10min.
◆请记得以夹子固定微量离心管的管盖部份，以免离心管在加热过程中盖子爆开、进水！
3）加热后，迅速把微量离心管移至冰浴中，静置数分钟。
4）离心数秒后，依序加入下列三种试剂：
2μLhexanucleotidemix
2μLdNTPmixture
1μLKlenowenzyme
5）以指头轻弹离心管，以便混合均匀。
6）短暂离心后，置于37℃恒温水槽中作用2h.
◆反应时间至少须要1h,最长可反应过夜。
7）作用完毕的后，加入2μL的0.2MEDTA,以便终止DNA聚合反应。
8）加入2.5μL4MLiCl及75μL纯酒精，混合均匀，置-20℃过夜。
隔天：
1）于13,000rpm,4℃离心15min.
2）倒出上清液，加入50μL的70%酒精，再离心5min.
3）倒出上清液并风干DNA.
4）最后以50μLTE溶解DNA.
PCR技术DNA聚合反应DNA聚合反应的方法步骤
