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Signalchem/CK1 alpha 1 siRNA Set I/50 nmol/C64-911-50
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Overview:
CK1alpha1 is a member of the CK1 family of serine/threonine protein kinases which play an important role in diverse cell processes. CK1alpha1 can regulate Smo cell surface accumulation and activity in response to hedgehog. CK1alpha1 phosphorylate Smo at several sites and phosphorylation-deficient forms of Smo fail to accumulate on the cell surface and are unable to transduce the hedgehog signal (1). CK1alpha1 dynamically associates with the CBM complex on T cell receptor engagement to participate in cytokine production and lymphocyte proliferation. CK1alpha1 can form complex with MDM2 which then regulates the stability of p53 and E2F-1 transcription factors (2).
Gene Aliases:
CSNK1A1, CK1, HLCDGP1, PRO2975, CK1A1
Genbank Number:
NM_001892
References:
1. Jia, J. et al: Hedgehog signalling activity of Smoothened requires phosphorylation by protein kinase A and casein kinase I. Nature 432: 1045-1050, 2004. 2. Huart, A S. et al: CK1alpha plays a central role in mediating MDM2 control of p53 and E2F-1 protein stability. J Biol Chem. 2009 Nov 20;284(47):32384-94.
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广州辉骏生物科技有限公司在发布的慢病毒shRNA干扰技术服务供应信息，浏览与慢病毒shRNA干扰技术服务相关的产品或在搜索更多与慢病毒shRNA干扰技术服务相关的内容。 查看更多
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2018-05-03
137781000.1 mLthermoThermo Fisher ScientificGibco/Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent/0.1 mL/13778100 查看更多
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2021-07-28
书中对RNA 干扰的理论系统、技术体系及应用研究进行整体的构思，以该领域最新的研究成果为基础，除了双链RNA干扰之外，重点突出了对新发现的微小RNA(miR NA)进展的描述，从而全面系统地描述了RNA干扰；结合作者实验中的研究经验，系统地介绍了当今RNA干扰在多种生物体系中研究的实用技术方法。... 查看更多
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2016-10-13
近日美国生物技术公司Alnylam宣布叫停revusiran的三期临床开发。revusiran作为RNAi疗法首个进入临床阶段的治疗性药物，它的失利是该领域面临的又一沉重打击。 查看更多
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2017-06-27
亚诺法生技股份有限公司（Abnova）在发布的CANX Pre-design Chimera RNAi供应信息，浏览与CANX Pre-design Chimera RNAi相关的产品或在搜索更多与CANX Pre-design Chimera RNAi相关的内容。 查看更多
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2021-09-08
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内... 查看更多
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2021-07-24
研究人员描述了一种能克服ELISA试剂盒问题的新方法。这种被称为siPools的低成本方法，能够简单而精确的生成含有多达60种siRNA的混合物，将脱靶效应降低到检出限以下。据介绍，siPools的关键一步是，设计针对同一个基因的几十种siRNA，并将这些序列结合到一个DNA模板上，不同siRNA序列之间以短序列相连。这些模板经过转录、退火和酶切就能生成成分明确的siRNA混合物。（延伸阅读：如何优化你的RNAi）为了验证siPools 查看更多
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2021-07-14
★服务描述 一般情况下，RNA干扰实验是通过化学合成小片段siRNA，或者构建shRNA表达质粒，通过转染试剂介导进入细胞实现RNA干扰。但是这两种方式对于难转染的细胞（例如原代细胞，干细胞，悬浮细胞等）往往因为转染效率低而导致RNA干扰实验失败。而通过构建慢病毒shRNA干扰质粒并包装病毒，再用病毒侵染靶细胞能很好的解决这一难题.★服务内容 1：shRNA干扰靶点序列的设计； 2：shRNA 慢病毒质粒的构建； 3：shR... 查看更多
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2017-01-23
RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂是由吉满生物科技（上海）有限公司代理或销售的Genomeditech品牌的试剂，产品来源于Genomeditech。吉满生物科技（上海）有限公司是中国最权威的RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂试剂销售服务商之一，在上海等地方销售RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的RNAiEnhancerRNAi干扰增强剂产品 查看更多
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2017-03-31
威斯腾生物在发布的慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物，让科研更简单！供应信息，浏览与慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装纯化、过表达慢病毒、干扰慢病毒、miRNA病毒包装、腺病毒包装纯化、过表达腺病毒、干扰腺病毒、腺相关病毒包装、逆转录病毒包装 ) 威斯腾生物，让科研更简单！相关的产品或在搜索更多与慢病毒与 RNAi（RNA干扰）(慢病毒包装 查看更多
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2021-09-22
LifeTechnologies是RNAi技术服务商之一，从事RNAi已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业RNAi技术服务，您可以搜索更多相关的RNAi实验技术服务，以便挑选到性价比高，合适的RNAi产品。而生物在线将会为您在RNAi方面提供全方位的解决方案。 查看更多
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RNA干扰技术在动物体内应用的研究进展123
小军医2021-07-31
欲研究某基因的功能，只知道现在很多干扰实验是在细胞水平体外进行实验的．不清楚目前能否应用RNA干扰在小鼠或其它动物上进行，这种设计是否可行．
请有经验的战友指点，若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章．
非常感谢！
请有经验的战友指点，若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章．
非常感谢！
RNA干扰与基因敲除123
蜗牛小灵子2017-02-23
本是小菜鸟，目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响，需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况，但是无论如何夜找不到抑制剂，做RNA干扰的话经费就超出预算了！急求各位大神，帮忙出个解决方案吧！非常感谢！
【求助】RNA干扰回复 核酸基因技术讨论版论坛123
庞紫2021-07-28
求大神解惑，RNA干扰回复实验是怎么做的？我的实验需要设计一个RNArescue组，不知道怎么操作。
RNA干扰技术的特点123
中国之星01912018-01-14
RNA干扰（RNA interferenceRNAi）通抑制转录水平基表达诱导功能缺失表型力工具由dsRNA（double-stranded RNA）引发特定基表达受抑制现象称RNA干扰作用
dsRNA（double-stranded RNA）介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径：特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA（small interfering RNA 或short interfering RNAs）siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径：要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’－5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶（RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶）作用加工裂解21－23核甘酸干扰RNA片断（siRNA）Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物（RNA－induced silencing complex or RISC）siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
dsRNA（double-stranded RNA）介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径：特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA（small interfering RNA 或short interfering RNAs）siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径：要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’－5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶（RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶）作用加工裂解21－23核甘酸干扰RNA片断（siRNA）Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物（RNA－induced silencing complex or RISC）siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
RNA干扰特点是什?RNA干扰特点是什么 123
七七系列18C2018-01-20
1.高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实1～100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。需要ATP：Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给：一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA；二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。
⒉特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor）不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85%～90%的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
⒉特异性：Elbashir等和Brummel kamp等发现在21～23个碱基对中有1～2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应：Holen等根据人TF(tissue factor）不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中，hTF167i和hTF372i能够抑制85%～90%的基因活性，hTF562i只能抑制部分基因活性，而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA，有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基，但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性，相对而言，GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应：Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比，两者的沉默基因效果无差异，但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后，hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性：在线虫中，双链RNA可以从起始位置传播到远的地方，甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1，它可以将双链RNA转运出细胞，因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物，因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
RNA干扰的详细实验步骤 实验方法 123
玩世3102018-01-20
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。 Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype. RNA Accepted (2006).）他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低，并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同，反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
【求助】RNA干扰技术 核酸基因技术讨论版论坛123
huihan19822021-07-29
新手上路，请大家多多关照，我是一名研究生，现在正在做RNA干扰方面的实验，可是却不知道RNA干扰的具体步骤，需要什么试剂，在网上查了半天也查不到，所以到这里来求助各位前辈，希望各位以前做过或者现在正在做这方面研究的前辈们能给指点一下迷津，在此谢谢了。
RNA干扰的机理及特点123
你大爷FqJi2021-07-26
RNAi抑制转座子活性
两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核；Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核；Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
RNAiRNA 干扰技术的原理与应用(上)123
wangjinsheng2003-03-11
RNAi（RNA干扰）技术：生物的遗传信息从脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）传到作为“信使”的核糖核酸（ＲＮＡ），再传到蛋白质，特定的基因控制细胞制造特定的蛋白质。如果ＲＮＡ被干扰，基因就会“沉默”，不起作用。科学家在这次实验中的做法是：设计一段微小的ＲＮＡ分子，与需要干扰的基因的某个片段吻合。这些称为“小干扰ＲＮＡ”的分子会打开细胞抵抗入侵病毒的一个天然防御系统，制造化学物质攻击这个基因释放出的信使ＲＮＡ，使之无法正常传递遗传信息。
这种技术，以前曾被用来研究植物和蠕虫等，但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗，使致病的基因“沉默”下来，不就可以治好许多疾病吗？而哈佛医学院的研究人员首次用ＲＮＡ干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说，他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效，将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中，科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质（ＦＡｓ）基因”。这种蛋白质存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序，据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了ＦＡｓ基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”ＦＡｓ基因的小干扰ＲＮＡ，发现有９０％的肝细胞接收到了这种ＲＮＡ分子，ＦＡｓ蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后，科学家给实验鼠注入大量ＦＡｓ抗体，激活细胞自杀程序，模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果，未接受ＲＮＡ干扰治疗的实验鼠有４０％在３天内死亡。而４０只接受过治疗的实验鼠有３３只活了下来，１０天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。
对于人来说，身体比老鼠大得多，血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰ＲＮＡ送到人体特定部位的方法，以便验证ＲＮＡ干扰技术在人体中的效果。
在此，我只是抛砖引玉，向大家简单介绍一种新的技术，希望对其感兴趣的同仁多多发表，也希望版主给予支持。
这种技术，以前曾被用来研究植物和蠕虫等，但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗，使致病的基因“沉默”下来，不就可以治好许多疾病吗？而哈佛医学院的研究人员首次用ＲＮＡ干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说，他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效，将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中，科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质（ＦＡｓ）基因”。这种蛋白质存在于细胞表面，它能够启动细胞的自杀程序，据认为，许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了ＦＡｓ基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”ＦＡｓ基因的小干扰ＲＮＡ，发现有９０％的肝细胞接收到了这种ＲＮＡ分子，ＦＡｓ蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后，科学家给实验鼠注入大量ＦＡｓ抗体，激活细胞自杀程序，模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果，未接受ＲＮＡ干扰治疗的实验鼠有４０％在３天内死亡。而４０只接受过治疗的实验鼠有３３只活了下来，１０天后研究人员检查这些实验鼠的肝部，发现完全正常。
对于人来说，身体比老鼠大得多，血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰ＲＮＡ送到人体特定部位的方法，以便验证ＲＮＡ干扰技术在人体中的效果。
在此，我只是抛砖引玉，向大家简单介绍一种新的技术，希望对其感兴趣的同仁多多发表，也希望版主给予支持。
酶标仪法测蛋白浓度123
狼恋莫_1x22018-01-14
RNA干扰的分子抑制机制的三种方式及原理
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用，使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用，使相应基因不能被转录，从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能，使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明，在小鼠卵母细胞中，通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论，针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化，从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内，、被切割产生siRNA片断，再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA，但mRNA因被降解使基因功能被阻断，这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性，只能引起同源mRNA降解，如果siRNA与mRNA有一个bp不配对，RNAi作用就极大降低，如果两者有4个bp不配对，就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时，发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA)，其长度也在21～25 nt之间，这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合，从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70～80 nt时，容易形成双链的茎环状结构，其双链茎的长度正好在21～25 nt之间，这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA，由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA，它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
CRISPRCas9基因敲除与RNA干扰优点比照_cas9基因编辑_cas12a_...123
橙asmxm31832018-01-14
RNA干扰不能称之为基因敲出，只出算是KNOCK-DOWN，使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT，是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
Sh RNA干扰后,mRNA水平干扰不明显,蛋白水平明显,如何解释?相关...123
butterflybow2021-07-20
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