shRNA干扰腺病毒载体由腺病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。腺病毒基因组序列是从元件5ITR开始，到元件3ITR结束。
腺病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子：一个是shRNA表达盒子，另外一个是Marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上，无需重新构建。我们提供了EGFP和mCherry两种荧光marker您选择。shRNA表达盒子则包括三部分序列：U6启动子、shRNA和终止子。U6启动子和Marker基因表达盒子已经克隆在pDown入门克隆上，每次构建载体，只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的shRNA和终止子克隆到pDown载体上，再通过site-specificrecominationcloning技术将pDown入门克隆克隆到腺病毒载体上即可。
1、克隆方法
赛业采用引物退火连接和位点特异性重组的克隆方法，将shRNA克隆到腺病毒载体上。
我们的shRNA干扰腺病毒载体使用了humanU6promoter转录shRNA。shRNA茌体内被剪切成21nt的单链siRNA，21nt的单链siRNA与mRNA互补引起mRNA的降解。干扰效率决定于21nt的单链siRNA是否只与目标mRNA特异性100%匹配。您可以通过www.vectorbuilder.com选择感兴趣的人、小鼠和大鼠的shRNA进行载体设计。
2、质量控制
我们会对每一个shRNA干扰腺病毒载体进行挑克隆，并测序shRNA片段。正确后，再进行酶切鉴定，酶切鉴定合格后交付。
赛业生物提供分子生物学技术服务：
基因调取：庞大的基因库，小鼠基因2万个，人类基因3万个，免费调取
载体构建：VectorBuilder高通量载体构建平台，2分钟完成在线载体设计
病毒包装：慢病毒包装、腺病毒包装、腺相关病毒包装
