
TheMMHRPDigoxigeninSystemforusewithmouseantibodiesonmousetissuesisadetectionsystemspecificallyformulatedtopreventendogenousmouseIgGbackgroundstainingwhenusingamouseprimaryantibodyonmousetissue.TheMMHRPDigoxigeninSystemprovidesreagentstolabelthemouseprimaryantibodyofinterestwithdigoxigenin,eveninthepresenceofothernon-IgGproteins,anddetectitonmousetissuewithanHRP-polymersystem.Withthisdetectionsystem,monoclonalantibodiesboundtomouseantigensinmousetissuecanbedetectedwithhighspecificityandsensitivity,whilesignificantlyreducingoreliminatingbackground.Eventhemostproblematictissuessuchaslymphatic,lungandkidneytissuesarevirtuallybackgroundfree.Additionally,theMMHRPDigoxigeninSystemdoesnotrequireovernightincubationsteps,allowingforrapidscreeningofmultiplemouseprimaryantibodyclones.
IntendedUse | RUO |
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Volume | 6.0ml |
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看引物能不能特异性扩增,你可以检查一下扩增后的熔解曲线,一般单一的峰是特异性引物,如果有双峰那就是扩出来了杂带
上面较高的是样本曲线,下面较低的是未加样本(茎环引物和引物、探针都加入)
一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引 物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用MasterMix,模板和引物的不同进行优化,达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中,有下面几点需要注意:
1. MasterMix不要反复冻融,如果经常使用,最好溶解后放在4度。
2. 更多的配制Mix进行,减少加样误差。最好能在冰上操作。
3. 每管或每孔都要换新枪头!不要连续用同一个枪头加样!
4. 所有成分加完后,离心去除气泡。
5. 每个样品至少3个平行孔。

