Cell line Information:
Designations:293T/17 [HEK 293T/17]Depositors: Rockefeller Univ.Growth Properties: adherentOrganism: Homo sapiens Morphology: epithelialSource: kidneyAntigen Expression: SV40 T antigen [45408]Age: fetusComments: The 293T/17 cell line is a derivative of the 293T (293tsA1609neo) cell line. 293T is a highly transfectable derivative of the 293 cell line into which the temperature sensitive gene for SV40 T-antigen was inserted. 293T cells were cloned and the clones tested with the pBND and pZAP vectors to obtain a line capable of producing high titers of infectious retrovirus, 293T/17. These cells constitutively express the simian virus 40 (SV40) large T antigen, and clone 17 was selected specifically for its high transfectability.
The Transfection Reagent:
293T/17 Cell Avalanche™ Transfection Reagent is a new class of unique chemical formulations specifically formulated and optimized for transfecting 293T/17 Cells. The proprietary formulation of lipids and polymers ensures the highest possible transfection efficiencies and viabilities for 293T/17 Cells. For details of the developing process of this reagent, please go to: How did EZ Biosystems develop Avalanche™ Cell type/cell line specific transfection reagent series?
Features:
- Specifically optimized to deliver nucleic acids into 293T/17 Cells
- Highest efficiency to ensure experimental success
- Lowest Cellular Toxicity-maintain cell density and reduce experimental biases
- 0.5 ml is able to transfect about 1000 wells of 24-well plate
- Simplest and straightforward protocols
- Deliver single or multiple plasmids
- Synthesized from 100% animal origin-free components, making it easy to validate the absence of zoonotic diseases, such as BSE or viruses, in research experiments or cells lines
- Compatible with serum
- Suitable for Reverse Transfection
- Compatible with transfection in any plate format
EZBiosystems美国EZBiosystems™公司是一家全球性转染试剂和基因表达生产服务提供商，公司的研发宗旨是让生命科学研究变得更简单，快速，容易！该公司主要产品之一为新一代转染试剂Avalanche 系列产品，该产品集合了组合化学，分子生物学和细胞生物学技术。公司致力于开发针对不同细胞类型的专用转染试剂。公司研发团队由多个学科经验丰富的专家组成，包括组合化学、脂类化学、生物物理学、分子生物学和细胞生物学。目前,EZBiosystems™主要提供广谱性基因及siRNA体外转染试剂、体内转染试剂、生物治疗性蛋白表达专用转染试剂以及150余种细胞特异性转染试剂。
EZBiosystems特约代理EZBiosystems品牌名称：EZBiosystemsEZBiosystems品牌logo：EZBiosystems品牌官网：http://ezbiosystems.com/EZBiosystems品牌链接：http://www.annoron.com/brand-342.htmlEZBiosystems品牌介绍：EZ生物系统™是一家全球性的基因转染和基因表达产品和服务提供商。EZBiosystems™isaworldwideprovideroftransfectionandgeneexpressionproducts&services.OneofthemajorfocusesofEZBiosystems™hasbeentheresearch,development,andmanufactureofnext-generationtransfectionreagents----theAvalanche®TransfectionReagentseriesbyapplyingourexpertiseincombinatorialchemistry,molecularBIOLOGy,andcellbiology. EZBiosystems品牌相关产品：品牌货号名称规格EZ BiosystemsEZT-CRPR-1Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent0.5ml 1.5mlEZ BiosystemsEZT-OMNI-1Avalanche®-Omni Transfection Reagent0.75ml 1.5ml5*1.5mlEZ BiosystemsEZT-EVDY-1Avalanche®-Everyday Transfection Reagent0.75ml 1.5ml
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荧光标记物常用的有几十种，比如FITC， PE等等，各个生产厂家还有自己的专利产品
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液（含DIG-dUTP）(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶（瓶1）0.75ul
DNA1ul（100pg）
程序：35个循环，退火温度55度。
第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物，亮度和对照相当，片段大小比标记的探针模板大，证明整个过程应该没有问题。
但一个月后重新用相同的体系，相同的程序，只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了！
TUNEL的缺点是：1），操作要求高，组织样本需要固定（即使是培养细胞，也需要固定），不恰当的固定方法对实验结果影响很大，导致背景过高或者信号过弱，因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2），大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤，从而产生DNA断裂，易引入假阳性;3）凋亡晚期细胞基因组大量降解，导致TUNEL标记反而减少，因此此法反应的是早期凋亡比例，不能严格反应凋亡比例，属于半定量研究。
尽管有如此多缺点，但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法，因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究，很少用此法。
凋亡检测中，TUNEL并不是过时的方法，现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反，还比以前多一点，因为现在体内实验越来越多了，甚至线虫的凋亡研究，都用TUNEL。
凋亡研究中，的确有几种方法过时了，当然是因为有替代方案了，比如DNAladder，电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的，前者用于细胞，而且主要是悬浮细胞，后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察，TUNEL的细胞staining，但这都不是主流。
回到lz的原帖，的确如大家所言，做贴壁细胞，不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径，只是确定比例，用最经典，最常用的subG1法即可，如果是不确定是否是凋亡，用AnnexinV，不过贴壁细胞用此法，要注意消化时间。
那为什么SFDA不批准CA199CEAAFP等检测试剂盒作为癌症检测的手段呢？
想请问下那个公司有专门的蛋白质荧光标记试剂盒出售。最好的是CY5的，我准备做三标。性价比越高越好
那些做过的前辈们指导一下。
