Tau promotes the assembly and maintains the structure of microtubules in neuronal cells3,4,5. While the fetal brain contains a single isoform of tau (Tau-352) the adult brain has several isoforms. Tau is both phosphorylated and O-GlcNAcylated6. The normal brain tau contains 2-3 moles of phosphate/mole of the protein. In Alzheimer disease tau is hyperphosphorylated, containing 3-4-fold more phosphate/mole of the protein than the normal tau7,8 and is the major protein subunit of paired helical filaments (PHF) that form the neurofibrillary tangles (NFT). NFT accumulation correlates with the clinical progression of Alzheimer"s disease. Tau-1A6 (TA-1002; Patent Pending) is a proprietary rPeptide Tau Monoclonal Antibody that binds all 6 Tau isoforms.
rPeptide是一家生物化学公司,坐落于美国乔治亚州,与雅典毗邻。该公司研发试剂是市场领跑者。主要产品涉及领域为老年性痴呆症与帕金森综合症研究使用的重组蛋白,重组多肽,抗体以及试剂等等,并成为了该领域的领导者。同时,该公司提供一系列外包服务,从分子生物学,蛋白表达与蛋白纯化到13C与15N统一标记蛋白与多肽。rPeptide技术平台可解决可溶性多肽/蛋白(例如:β-淀粉样蛋白、廋蛋白、前胰岛素)在大肠杆菌中表达等历史性难题。
1、Beta-AmyloidPeptides β-淀粉样多肽系列产品
2、 Proteins 蛋白系列产品
3、 Labeledpeptides&proteins 标记多肽与标记蛋白系列产品
4、MonoclonalAntibodies 单克隆抗体系列产品
5、PolyclonalAntibodies 多克隆抗体
6、Bydisease 人类疾病相关产品
7、Contractservices 外包服务
7.1 RecombinantExpressionofPeptidesandProteins 多肽与蛋白重组表达
7.2 UniformLabelingofPeptidesandProteins 多肽与蛋白进行标记
7.3 SyntheticPeptideSynthesis 多肽合成
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想请问下那个公司有专门的蛋白质荧光标记试剂盒出售。最好的是CY5的,我准备做三标。性价比越高越好
那些做过的前辈们指导一下。
探针
ddH2O36.25ul
buffer(瓶3)5ul
核苷酸混合液(含DIG-dUTP)(瓶2)2.5ul
dNTPStockSolution(瓶4)2.5ul
引物F1ul(10pmol/ul)
R1ul(10pmol/ul)
酶(瓶1)0.75ul
DNA1ul(100pg)
程序:35个循环,退火温度55度。
第一次通过探针标记得到了相应的PCR标记产物,亮度和对照相当,片段大小比标记的探针模板大,证明整个过程应该没有问题。
但一个月后重新用相同的体系,相同的程序,只是探针模板的量不同却什么都扩不出来。不知道问题出在哪了!
那为什么SFDA不批准CA199CEAAFP等检测试剂盒作为癌症检测的手段呢?
TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNAladder,电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用AnnexinV,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。