
Cellartis enhanced hiPS-HEP v2 kits provide an inexhaustible supply of mature hepatocytes derived from human induced pluripotent stem (hiPS) cells. hiPS-HEP cells have functional drug-metabolizing machinery over a 14-day assay window, making them ideal for in vitro drug discovery, drug metabolism, and toxicology-related studies. Mature, robust metabolic features support metabolic disease modeling.
Cellartis enhanced hiPS-HEP v2 kits provide an inexhaustible supply of mature hepatocytes derived from human induced pluripotent stem (hiPS) cells. hiPS-HEP cells have functional drug-metabolizing machinery over a 14-day assay window, making them ideal for in vitro drug discovery, drug metabolism, and toxicology-related studies. Mature, robust metabolic features support metabolic disease modeling.
The user-friendly kit format includes complete media and components for long-term assays. Compared to other hepatic cell models, these cells survive longer in culture, which enables a longer assay window in chronic toxicity experiments and for metabolic disease modeling.
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其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNAladder,电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用AnnexinV,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。
而放射性核素标记,是对体外诊断试剂的某些元素进行放射性特征性标记,便于检测而已,这类的放射性强度不大,危害不高
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仪器:元素分析、分子光谱仪、热分析、色谱仪、联用系统、质谱仪
消耗品和附件:元素分析、原子吸收、气象色谱仪、液相色谱、热分析、红外光谱仪、荧光光谱
软件:实验室信息管理系统
2.生物研发(Bio Discovery)
仪器:液体闪烁计数仪、自动化液体处理、微孔板读数仪
试剂:临床诊断试剂、儿童健康试剂、基于细胞的检测试剂、孕妇胎儿健康试剂、放射性化学试剂与放射性治疗、新生儿筛查试剂
消耗品和附件:活细胞成像、液体处理
3.测试和诊断服务(Diagnostics)
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4.医学影像(Medical Imaging)
X射线平板检测仪器:PerkinElmer在非晶硅(a-Si)平板检测器的设计、开发以及制造领域都处于世界的领先地位。所开发的产品广泛应用于人类医学、兽医学、工业无损探伤(NDT)等领域。XRD系列检测器拥有极高的图像分辨率,高达100帧/秒的采集频率,更可以适应20keV~15MeV的高能射线,信息存储读取方便。
PerkinElmer提供XRD系列的2种尺寸平板检测器 - 8英寸(21厘米)和16英寸(41厘米)。每种都有多种选择,如采集速度、能量等级、闪烁体、滤镜、以及采集频率选择等。PerkinElmer也会根据客户的需要提供最适合的型号。
想请问下那个公司有专门的蛋白质荧光标记试剂盒出售。最好的是CY5的,我准备做三标。性价比越高越好
那些做过的前辈们指导一下。

