Description
Details
MapMarker® 400 contains 20 discrete DNA fragments ranging in size from 70 to 400 base pairs labeled with X-Rhodamine at 8fmol/Band/ul. They are uniformly spaced at 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 190, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, and 400 base pairs.Unit Size:400ul (800 Loadings)
MapMarker® DNA sizing standards are sets of high quality fluorescently labeled DNA fragments designed to provide accurate base calling and precision sizing of samples with consistent intensities and migration patterns. They are compatible with the most commonly used fluorescent-based separation instruments systems, including capillary-based gel electrophoresis genetic analysis systems.
MapMarker® standards are stable for a minimum of 18 months when stored in the dark at 4°C.
If you require a different combination of bands you can create your own custom single-stranded fluorescent DNA sizing standard for your unique application using our MapMarker® design tool.
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其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
操作步骤:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNAladder,电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用AnnexinV,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。
而放射性核素标记,是对体外诊断试剂的某些元素进行放射性特征性标记,便于检测而已,这类的放射性强度不大,危害不高
百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台,Orbitrap Fusion质谱平台,Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC,推出基于iTRAQ的定量蛋白组分析服务技术包裹,您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的蛋白寄给我们,我们会负责项目后续所有事宜,包括蛋白酶切、肽段标价、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。
PerkinElmer提供完整的解决方案包括:试剂、仪器、平台、软件、随时可用的方法、经过全面测试和优化的消耗品以及关于应用的定制式培训。
仪器:元素分析、分子光谱仪、热分析、色谱仪、联用系统、质谱仪
消耗品和附件:元素分析、原子吸收、气象色谱仪、液相色谱、热分析、红外光谱仪、荧光光谱
软件:实验室信息管理系统
2.生物研发(Bio Discovery)
仪器:液体闪烁计数仪、自动化液体处理、微孔板读数仪
试剂:临床诊断试剂、儿童健康试剂、基于细胞的检测试剂、孕妇胎儿健康试剂、放射性化学试剂与放射性治疗、新生儿筛查试剂
消耗品和附件:活细胞成像、液体处理
3.测试和诊断服务(Diagnostics)
特殊诊断:分子测试,孕妇标记物测试,新生儿测试
基因筛查:全自动分辨荧光免疫分析系统,半自动时间分辨免疫分析仪,随机式全自动时间分辨荧光免疫分析系统,串联质谱新生儿筛查仪
PerkinElmer的产品(仪器、检测设备和软件)可以尽早检测出孕期异常。PerkinElmer是唯一一家使用游离 Beta 绒毛膜促性腺激素检测唐氏综合症和染色体 18/13 缺陷的供应商。此项专利技术能够使检出率达到目前该领域的最高水平,让更多家庭提早知情,有备而战。
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4.医学影像(Medical Imaging)
X射线平板检测仪器:PerkinElmer在非晶硅(a-Si)平板检测器的设计、开发以及制造领域都处于世界的领先地位。所开发的产品广泛应用于人类医学、兽医学、工业无损探伤(NDT)等领域。XRD系列检测器拥有极高的图像分辨率,高达100帧/秒的采集频率,更可以适应20keV~15MeV的高能射线,信息存储读取方便。
PerkinElmer提供XRD系列的2种尺寸平板检测器 - 8英寸(21厘米)和16英寸(41厘米)。每种都有多种选择,如采集速度、能量等级、闪烁体、滤镜、以及采集频率选择等。PerkinElmer也会根据客户的需要提供最适合的型号。
想请问下那个公司有专门的蛋白质荧光标记试剂盒出售。最好的是CY5的,我准备做三标。性价比越高越好
那些做过的前辈们指导一下。

