| Source | Human 293 Cells | M.W. | 37-40 kDa | CAS No. | |
|---|---|---|---|---|---|
| Structural Info | |||||
| Formulation | Lyophilized in sterile filtered solution of PBS. | ||||
| Reconstitution | Before reconstitution, a brief spin is recommend todrive down any material dislodged from the bottom of the tube. The lyophilized protein should bereconstituted in sterile H2O to a desired concentration. | ||||
| Stability | The lyophilized protein is stable for at least oneyear if stored at -80 °C. Reconstituted protein is stable for at least four weeks at 4 °C,but should be stored in aliquots at -80 °C for longer term. Avoidrepeated freeze and thaw. | ||||
| Purity | Greater than 90% as determined by SDS-PAGE analysis | ||||
| Biological Activity | The activity was determined by using a TCF reporter gene assay in cultured human cells.The IC50 ranges from 100 - 500 ng/ml in the inhibition of 100 ng/mL WNT-3a activity.Activity in other assays | ||||
| Country of Origin | USA | ||||
DKK-1, Dickkopf-related protein-1, is a member of the DKKprotein family which includes DKK-1 through DDK-4. DKK was originally identified as ahead-forming molecule in Xenopus. Mechanisticstudies showed that DKK-1 inhibits the Wnt /β-catenin signaling pathway byforming inhibitory complexes with co-receptor LRP5/6. Inhibition of Wnt/β-catenin signaling isessential for posterior patterning and anterior development in vertebrates, supportedby the discovery that DKK-1 knock-out mice lack head formation. StemRDexpressed recombinant human DKK-1 in human 293 cells as a 37-40 kDaglycoprotein containing 235 amino-acid residues. It is purified by a series of chromatography including HPLC.
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决定酶促反应最大速度Vm的因素是什么?是同一底物,尽管加不同种酶,其Vmax都相同吗?可以画曲线图解释一下吗?可是根据米曼氏方程来看又有点矛盾,Km变大,Vmax也需变大,才可使v变大。所以题目所述到底应该怎么理解呢
不同的酶Km值不同,同一种酶与不同底物反应Km值也不同,Km值可近似的反应酶与底物的亲和力大小:Km值大,表明亲和力小;Km值小,表明亲合力大。
Km最小的那个底物,就是酶的最适底物。
这篇题为“晶体结构揭示TET蛋白介导的氧化反应底物偏好性机制”的研究论文,首次报道了TET蛋白对三种DNA甲基化衍生物不同催化活性的分子机制,为基因组中5-羟甲基胞嘧啶相对稳定存在提供了分子水平的解释。该论文是徐彦辉课题组在DNA甲基化领域作出的又一突破性成果。组长徐彦辉为复旦大学生物医学研究院研究员,复旦大学附属肿瘤医院兼职教授。该课题组曾于2013年在《细胞》杂志报道TET蛋白的三维结构,于2015年初在《自然》杂志报道DNA甲基化建立的机制研究(参考徐彦辉课题组网站,http://xtal.fudan.edu.cn/index-ch.html)。
据悉,人体基因组DNA是生命遗传信息的基本载体,生命延续和繁衍需要DNA上的一种“甲基化修饰”。“甲基化修饰”具有调控人体内特定基因的表达和决定细胞命运的作用,可使细胞发生程序化的改变。哺乳动物基因组的胞嘧啶上会产生甲基化修饰,称为5-甲基胞嘧啶(5mC,即第5种碱基)。而TET蛋白是哺乳动物细胞中的一种氧化酶,可以执行DNA去甲基化功能。近期研究发现,TET蛋白在去甲基化过程中,将5mC氧化为5hmC(5-羟甲基胞嘧啶,第6种碱基)后,可继续催化5-hmC转化为5-fC(5-醛基胞嘧啶,第7种碱基)和5-caC(5-羧基胞嘧啶,第8种碱基)。其中,5hmC在细胞内相对稳定存在,且其含量远远高于5fC和5caC。但这一现象一直没有合理的生物学解释。徐彦辉课题组综合利用结构生物学,生物化学和计算生物学等研究方法,揭开了这一谜底。
徐彦辉课题组的生化实验表明,TET蛋白对5mC具备很高活性(产生5hmC),而对5hmC(产生5fC)和5fC(产生5caC)的活性很低。TET蛋白就如同连续的三个扶梯,在转化不同碱基的情况下,其转化速度明显不同,导致产生较多的5hmC和少量的5fC及5caC。结构研究发现,5mC在TET蛋白催化口袋中的取向使得它很容易被催化活性中心俘获并被氧化为5hmC。5hmC和5fC由于已经有氧的存在,其在催化口袋中被限制住,不容易发生进一步的氧化反应,导致TET蛋白对这两种碱基活性降低。在这样的催化能力差异下,TET会很顺利将5mC产生5hmC,一旦5hmC产生,TET将不容易使其进一步氧化为5fC和5caC,导致细胞内5hmC相对稳定,并且其含量远远高于5fC和5caC。在特定的基因中区域,TET蛋白可能被特定的调控因子激活,会跨越能垒阻碍产生高活性的TET,连续氧化为5fC和5caC。这使得5mC在TET蛋白催化下更容易被氧化为5hmC。这一发现解决了困扰表观遗传学领域的一个难题,也为揭示其他蛋白质逐步催化反应的分子机制提供了新思路和新方法。
据悉,该项工作是由复旦大学徐彦辉课题组与中国科学院上海药物所罗成课题组合作完成的,徐彦辉课题组的胡璐璐博士和程净东博士,以及罗成课题组的卢俊彦博士是该项工作的主要完成人。该项研究的结构数据是在中科院上海光源BL-17U,国家蛋白质科学中心BL-19U等线站上采集。
底物为参与生化反应的物质,可为化学元素、分子或化合物,经酶作用可形成产物。一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。
特定的底物会在特定的酶作用下,合成或分解。
酶,指具有生物催化功能的高分子物质。 在酶的催化反应体系中,反应物分子被称为底物,底物通过酶的催化转化为另一种分子。几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与,以提高效率。与其他非生物催化剂相似,酶通过降低化学反应的活化能来加快反应速率,大多数的酶可以将其催化的反应之速率提高上百万倍;事实上,酶是提供另一条活化能需求较低的途径,使更多反应粒子能拥有不少于活化能的动能,从而加快反应速率。酶作为催化剂,本身在反应过程中不被消耗,也不影响反应的化学平衡。酶有正催化作用也有负催化作用,不只是加快反应速率,也有减低反应速率。与其他非生物催化剂不同的是,酶具有高度的专一性,只催化特定的反应或产生特定的构型。

