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近来我们在一次培训中看了一篇关于支原体的幻灯片，感觉其中有部分内容还不错，特于大家共享！

1、请问我用NEB的PNGaseF处理糖蛋白后，上样跑电泳之前需不需要再煮沸一次蛋白？因为第一步加入糖蛋白变性缓冲液后会有一个煮沸变性的步骤，不知加入PNGaseF后还用再煮沸一遍吗？

2、如果经过脱糖处理后的蛋白想继续下一步实验用的话，怎样把它纯化出来？透析还是超滤？之前试过超滤除盐，损失太大。

3、另外各位有没有用过的检测糖蛋白含不含有糖基的试剂盒推荐？简单检测“有或无”的那种就可以，品牌能提供一下最好啦！

谢谢！

实验室要开展支原体检测，方法是PCR法，先要采购试剂盒，用过的同学给推荐一下好用的品牌呗

请问有园友用过碧云天的抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒吗？求交流，感谢！

我用Promega公司的双荧光素酶检测试剂盒（E2920）检测到的firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；海肾萤光素酶活性有10的6次方。

我用Ad293细胞做了转染，fireflyluciferase质粒：RanillaLuciferase质粒=0.1ug：0.025ug/一个孔（96孔板），共转染了二天，再进行双萤光素酶检测。

我想了解fireflyluciferase活性用promega的这个E2920-双萤光素酶试剂盒检测得到10的3次方，这种数值正常吗？

我做了3次重复实验，每次firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；而海肾萤光素酶活性有10的6次方。

求指教？fireflyluciferase活性低？会是什么原因呢？

有没有比较好的厂家生产的G6PD试剂可用于全自动生化分析仪的？最好是能做血清标本。

操作步骤(仅供参考)：
1、 配制JC-1染色工作液：
取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照：
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞：
a. 取1～6×105细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 4℃ 600g离心3～4min，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，应先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 吸除上清，用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体：
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10～100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描，激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析：
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。

注意事项：
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用，但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后，才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×)，否则导致JC-1很难充分溶解，严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时，尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×，因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有一定毒性，请注意小心防护。

百奥森18分钟霉菌毒素检测试剂盒，有需要的可以了解下！多种规格型号可供选择

产品名称

黄曲霉毒素B1(AFB1）酶免检测试剂盒

黄曲霉毒素B1(AFB1）酶免检测试剂盒

赭曲霉毒素A（OTA）酶免检测试剂盒

玉米赤霉烯酮（ZEN）酶免检测试剂盒

玉米赤霉烯酮（ZEN）酶免检测试剂盒

呕吐毒素（DON）酶免检测试剂盒

黄曲霉毒素M1（AFM1）酶免检测试剂盒

总黄曲霉毒素(AFT）酶免检测试剂盒

T-2毒素（T-2）酶免检测试剂盒

伏马毒素B1（FB1）酶免检测试剂盒

作为一个试剂供应商，最喜欢客户咨询的是炎症指标因子的检测，因为可以有一大堆厂家推荐，进口的有R&D，bender，BD；国产的有依克赛，达科为。最头疼的是神经递质类的检测，肾上腺素，去甲肾上腺素，5-羟色胺，褪黑素，乙酰胆碱等等，我很迷惘，应该推荐什么给客户呢？
前一段时间，客户让我推荐大鼠的褪黑素检测试剂盒，我对这个指标也是很慎重，因为这个指标不一般。我也查了一些文献，从检测方法上，首选高效液相色谱法，但问题是检测系统最好是电化学检测，这个检测系统，我问了广州好多实验室，都没有配备；另外就是查到了Raybiotech公司的放免试剂盒，价格也不贵，3200多，但是厂家需要现订做这个试剂盒，生产周期是6个月左右，很少有客户能接受这个到货周期；第三，我查到了Millipore公司的Luminex检测系统，有这个DIY套装，突然眼睛一亮，毕竟是millipore是大品牌，而且液相芯片技术也越来越普及，权衡所有利弊，我给客户推荐了millipore的这个试剂盒。虽然客户后面因为价格问题，没有通过我采购，但是我还是感到很欣慰，因为自己的推荐还是扎根于客户的心里了。
接下来就是客户通过其他的供货商采购到了Millipore的大鼠褪黑素检测试剂盒，采用的方法是液相芯片法。然后就是在技术员的指导下进行实验，后来结果让我分析了一下，标准曲线是invalid，我发现了标准曲线中一个点偏差太大，建议客户删掉这个点，一切就OK了，试剂盒自带的control，通过计算也落在了厂家说明书的范围内。从标准曲线和control看，整个盒子没有一点问题。但是真正的问题来了，样本所计算出来的浓度大部分在20000pg/ml，这个和客户及我手头查到的文献，差别不是一个数量级了，可以认定为差了3个数量级了。Millipore的国外技术很快有了回复，经过他们的检测正常大鼠血清标本褪黑素的范围的确落在了他们试剂盒的标准曲线范围内，16000-400000pg/ml的范围，但是对于客户的疑问，他们会采用其他的方法去验证，2周后会给客户一个答复。
现在时间没有到2周，我也不知道最终的答复是什么。从这件事情上，我想了很多，很多客户做的很多指标的检测都是希望定性加定量，但是在定量的过程中，出现了各个厂家有各自的标准，整个行业没有统一的标准了，这就决定在整个试剂盒研发的过程中，任重而道远。大家过多的去相信权威，而不知道权威下面是不是掩饰了什么。
目前，我们去评价国产的ELISA试剂盒，不管你认定它是假货也好，是真实的质量有保障的也好。你去评价这些的标准是什么，认定的理由是什么，是靠经验，靠周围同学、试剂商的推荐，还是靠这些厂家的权威？目前没有统一的质控标准品或者血清样品，这些评价都是非常苍白无力的。目前为什么假的ELISA试剂盒这么猖狂，质量差的试剂盒也可以占据市场，就是因为所有盒子的标准品都是自己提供的，标准都是自己定的，自己的标准就是自己卖出试剂盒的权威认证。
版主鱼小留言:
很不错的商家感想。赞一个。

如题，我需要检测小鼠脂肪组织的PKA活性，想找一个准确实用的试剂盒。请大家推荐一下吧！谢谢！！

你购买的是血液的还是唾液的，但艾滋病还是要早发现，早预防。如果没有身份证，建议去医院检查，挂皮肤科，给医生说检查艾滋，就可以了。如果爱面子，京东山 爱/卫自己测。如果有身份证，那就带上，给CDC人员说检查艾滋，他们会问你用什么方法，有快速法和酶免法，快速法10分钟拿结果，酶免法1至7天拿结果，但不管什么方法，都是很准确的。希望能帮到你。

试剂盒,是指能完成一个特定实验的必需的试剂/器材的集合.试剂盒具有简单、快速、方便,适于现场操作等特点,对基体分析操作技能要求降低,更易实现流水化、标准化管理,有效排除了实验人员主观因素的影响,降低实验过程中的偶然误差,被广泛应用于检测领域.
试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势,2005年全球市场销售额超过200亿美元,且以15%左右的速度逐年增长.一方面是试剂盒的迅猛发展,而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显,试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善,没有相应的标准或质量评价政策.且其灵敏度,稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要,采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑.
同时,食品安全领域是当前问题最多、最受关注的领域,这个领域的检测包括了物理、化学、微生物及分子生物学基础理论,无论是按检测原理、用途还是其它分类方式,涉及食品安全检测项目的试剂盒的品种是最全最多的.因此,从该领域着手从事评价制度的研究,便于获得基础性数据结果,并由此推广至动植物检疫及其它领域.
随着H7N9禽流感疫情的不断发散,国家流感中心已经多次发放人感染H7N9禽流感检测试剂,覆盖了全国31个流感网络实验室,并表示,诊断试剂的广泛发放是实现关口前移,控制疫情传播、蔓延的重要手段.而一旦H7N9监测关口继续前移,主动监测范围扩大,病毒检测试剂的需求量将进一步加大.
可采用H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）和H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）,定价分别为48人份/盒和48反应/盒,相比市场此前预期的100-200元之间的价格定位低了很多.在检验方法上,卫纪委提醒,前者需要配备全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)等必须设备及咽拭子样本,后者卫计委推荐采用达安基因生产的核酸提取试剂盒进行检验.