Description
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TransfectionReagentforHMEC Cells(MammaryEpithelial,BreastCancerCells)
- Proprietarycationiclipidsformulation
- HightransfectionefficiencyofsmallRNA(siRNA,shRNA,miRNA),mRNA,pDNA
- KitincludesTransfectionEnhancerreagent
- Work inthepresenceofserum
- Aprovenreagentforestablishingstablecelllines
- Optimizedtransfectionprotocolsareadaptedforusewithbothstandard&reversetransfectionmethods
- Download HMECtransfectionprotocol:[PDF]
- Download HMECCRISPR/Cas9transfectionprotocol:[PDF]
- DownloadPowerPointpresentationforHMECcellstransfectionkit:[PPT]
- DevelopedandmanufacturedbyAltogenBiosystems
TransfectionEfficiency:
Reagentexhibitsatleast76%transfectionefficiencyofsiRNAdelivery.TransfectionefficiencywasdeterminedbyqRT-PCR.
TransfectionProtocolandMSDS:
DownloadAltogenBiosystemsHMECTransfectionProtocol:[PDF]
DownloadMSDS:[PDF]
HMEC CellLine:
Breastcancerrepresentsthemostprevalentmalignancyamongwomen,withmorethan300,000newcasesdetectedeveryyear.Also,itresultsinover40,000deathsintheUnitedStatesannually,makingitaseriouspublichealthchallenge,accordingtotheAmericanCancerSociety.Breastcancerpreclinicalresearchisessentialfortheinvestigationoftumordevelopmentaswellasthetherapeuticpotentialofanewdrugcandidate.TheHMECbreastcancercelllineiswidelyconsideredtobeaneffectivetoolforcarryingoutcarcinogenscreening.TheHMEC(humanmammaryepithelialcancer)celllinewasderivedfromglandulartissueofafemalebreastcancerpatientandisasuitablehostforstudiesrelatedtobreastcancerbiomedicalresearch.HMECcelllinedisplayscuboidalmorphologywithacharacteristicpatternofswirls.ResearchapplicationsoftheHMECcelllineincludecarcinogenscreeningandthreedimensionalculturing.AltogenBiosystemsprovidespre-optimizedcationiclipid-basedtransfectionreagentkitsfortheHMECbreastcancercellline.
Data:
Figure1. siRNAstargetingLaminA/CmRNAornon-silencingcontrolsiRNAweretransfectedintoHMECcellsfollowingtherecommendedprotocol.At48hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyqRT-PCRforgeneexpressionlevels.18SrRNAlevelswereusedtonormalizetheLaminA/Cdata.Valuesarenormalizedtountreatedsample.Dataaremeans±SD(n=3).
Figure2.ProteinexpressionofLaminA/CinHMECcells.DNAplasmidexpressingLaminA/CorsiRNAtargetingLaminA/CweretransfectedintoHMECcellsfollowingAltogenBiosystemstransfectionprotocol.At72hourspost-transfectionthecellswereanalyzedbyWesternBlotforproteinexpressionlevels(normalizedbytotalprotein,10µgoftotalproteinloadedpereachwell).Untreatedcellsusedasanegativecontrol.
Selected invivo transfectionproductcitations(ALTOGEN® INVIVO TransfectionKits usedinthefollowingpublications):
- Nature.2008454(7203):523-7.Innateimmunityinducedbycomposition-dependentRIG-I…Saitoetal[PDF]
- Am JPathology.2010177(4):1870-80.RoleofocularcomplementfactorHinamurinemodel…Lyzogubovetal[PDF]
- NatureBiotechnology.201129(4):341-5.DeliveryofsiRNAtothemousebrainby…Alvarez-Ervitietal [PDF]
- CancerResearch.201171(15):5144-53.InhibitionofmiR-193aexpressionby…Iliopoulosetal[PDF]
- RNA.201016(11):2108-19.RNaseLreleasesasmallRNAfromHCVRNAthatrefolds…Malathietal[PDF]
- Diabetologia.201255(7):2069-79.Thep47phox-andNADPHoxidaseorganiser1…Younetal [PDF]
- BritishJournalofCancer.2012 107(3):516-26.TIGARinducesp53-mediatedcell-cycle…Madanetal[PDF]
- Hypertension.201463(2):353-61.Tissuetransglutaminasecontributesto…Liuetal[PDF]
- Circulation Research.201015;107(8).Kruppel-likefactor-4transcriptionallyregulates…Cowanetal[PDF]
- Hypertension.201259(1):158-66.Roleofuncoupledendothelialnitricoxidesynthase…Gaoetal[PDF]
- JounalofBIOLOGicalChemistry.2012287(4):2907.Chaperoningofmutantp53protein…Gognaetal [PDF]
- PLoSPathogens.20128(8)Uridinecompositionofthepoly-U/UCtractofHCVRNA…Schnelletal[PDF]
- JProteomeRes.2012(11) Retinalproteomeanalysisinamousemodelofoxygen-induced…Kimetal[PDF]
- J TranslMed.201015;8:133.Preventionofhyperglycemia-inducedmyocardialapoptosis…Zhangetal[PDF]
- MolCellBiol.201333(7).SCO2inducesp53-mediatedapoptosisbyThr845phosphorylation…Madanetal[PDF]
- Hypertension.2015 65(2):430-9.Neurokinin3receptorandphosphocholinetransferase…Parchimetal [PDF]
- Gastroenterology.2011141(2) Differential typeIinterferon-mediatedautophagictrafficking…Desaietal[PDF]
- PLoSPathog.201410(10)ExosomesfromhepatitisCinfectedpatientstransmitHCV…Bukongetal[PDF]
HMECTransfectionKit
AltogenBiosystems:
AltogenBiosystemsisalifesciencescompany thatmanufacturesover100celltypespecificandpre-optimizedtransfection kits, electroporationbuffers,andtargetedinvivo deliverykitsandreagents.Advancedformulationofreagentsandoptimizedtransfectionprotocolsprovidehighlyefficientintracellulardeliveryofbiomolecules(proteins,DNA,mRNA,shRNA andsiRNA,andsmallmoleculecompounds).Readmore abouttransfectiontechnologyatAltogen’s TransfectionResource.
AltogenLabsResearchServices:
AltogenLabsprovidesGLP-compliantcontractresearchstudiesforpre-clinicalresearch,INDapplications,anddrugdevelopment.BiologyCROservices include:Xenograftmodels(30+),developmentofstablecelllines,ELISAassaydevelopment,cell-basedandtissuetargetedRNAistudies,safetypharm/toxassays,andotherstudies(visitAltogenLabs.com).
VolumeOptions:
- 0.5ml(Catalog#1769)
- 1.5ml(Catalog#1770)
- 1.5mlCRISPR(Catalog#2155)
- 8.0ml(Catalog#7049)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究，药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化，可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外（癌细胞系）和体内（动物组织靶向试剂、癌细胞系）递送货物分子，包括质粒DNA，各种类型的RNA（mRNA，siRNA，shRNA，microRNA），蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发，生产和销售特定细胞系的转染试剂，用于细胞间生物分子的传递，并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物，脂质体，纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学，组合化学，和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务，包括代稳定的细胞系，细胞银行和冷冻保存，焦磷酸测序，克隆，RNA干扰（RNAi）和基因沉默服务，发展分析，siRNA文库筛选，并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生，可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择，无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务，包括设计与合成的siRNA的利益，验证siRNA的沉默效率，siRNA转染条件的优化，使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质（即RNA或DNA），通常是在生物实验室用来研究基因功能，基因表达的调节，生化映射，突变分析，和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子，这种分子，使质粒DNA（PDNA），信使RNA（mRNA），短干扰RNA（siRNA），小分子RNA（miRNA）的，并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是，无单提货的方法或转染试剂，可以适用于所有类型的细胞，细胞的细胞毒性和转染效率显着不同，取决于试剂，协议，并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子，脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂，使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应，并提供高效的siRNA转染的DNA，并在体内的蛋白质。由科学“杂志（2010年12月17日）：PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司，开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子（DNA、RNA、蛋白质）的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识，开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中，常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是，由于细胞毒性和转染效率的差异很大，并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型，因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外（癌细胞系）和体内（用于动物研究的组织靶向试剂）转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发（ELISA、IC-50、qPCR）、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系，将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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1、 配制JC-1染色工作液：
取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照：
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞：
a. 取1～6×105细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 4℃ 600g离心3～4min，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，应先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 吸除上清，用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体：
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10～100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描，激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析：
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
注意事项：
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用，但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后，才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×)，否则导致JC-1很难充分溶解，严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时，尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×，因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有一定毒性，请注意小心防护。
实验室要开展支原体检测，方法是PCR法，先要采购试剂盒，用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
公司产品通过ISO9001质量体系认证
公司通过ISO14001环境体系认证
公司产品获得国家多项专利证书
公司产品获得计算机软件著作权
核心科技：自主品牌深芬仪器、中国制造、专利产品、技术保障
运输保证:优质EPE珍珠棉缓冲材料、牛皮瓦楞纸、免熏蒸木箱满足出口及国内运输要求。
售后保证:仪器免费保修一年,终身维护值得信赖！
牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定，它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质，为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年，英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。
