Description
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Electroporation Kit for RBL-2H3 Cells (Basophilic Leukemia Cells, CRL-2256)
- Electroporation Kit include: electroporation buffer + buffer-specific optimized electroporation protocols
- Pre-optimized electroporation protocols are provided for delivery of plasmids (DNA), siRNA, mRNA, and proteins
- Proprietary electroporation buffer formulation mimics cellular cytoplasm composition (superior electropore resealing)s
- Certified RNAse- and DNAse-free electroporation buffer
- Effective electroporation delivery and high cell viability provides reproducible electroporation results
- High cell viability and superior cell recovery rates
- Electroporation protocols are provided with with the purchase of the Electroporation Kit
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Electroporation Buffer:
4 mL of electroporation buffer is sufficient for 20 reactions using standard 0.2 cm elecrtoporation cuvette
30 mL of electroporation buffer is sufficient for 150 reactions using standard 0.2 cm elecrtoporation cuvette
Electroporation Efficiency:
Electroporation kit provides 80-95% delivery efficiency of siRNA. Electroporation efficiency was determined by qRT-PCR.
Electroporation Protocol and MSDS:
Electroporation protocols are provided with the purchase of the Electroporation Kit
Download MSDS: [PDF]
RBL-2H3 Cell Line:
RBL-2H3 was established in 1978 in the Laboratory of Immunology at the National Institute of Dental Research from basophilic leukemia cells in a Wistar Rat (Rattus norvegicus). These cells are useful because they can secrete histamine and other mediators. They have been useful to study of secretion in mast cells. Although nearly all lots of fetal bovine serum support the growth of these cells, the cells grown in some lots degranulate better after FcERI aggregation. RBL-1 (CRL-1378) is another basophilic leukemia cell line that does not degranulate.
Data:
Selected in vivo transfection product citations (ALTOGEN® IN VIVO Transfection Kits used in the following publications):
- 2008 454(7203):523-7. Innate immunity induced by composition-dependent RIG-I …Saito et al [PDF]
- Am J Pathology. 2010 177(4):1870-80. Role of ocular complement factor H in a murine model … Lyzogubov et al [PDF]
- Nature Biotechnology. 2011 29(4):341-5. Delivery of siRNA to the mouse brain by … Alvarez-Erviti et al [PDF]
- Cancer Research. 2011 71(15):5144-53. Inhibition of miR-193a expression by… Iliopoulos et al [PDF]
RBL-2H3 Electroporation Kit
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems manufacturers preoptimized transfection kits for cancer research. Reagents and transfection protocols are optimized for individual cancer cell lines. Altogen Biosystems developed two types of in vivo delivery kits for animal research: Tissue-targeted reagents (delivery into liver, pancreas, and kidney tissues), and in vivo biodistribution reagents (PEG-Liposome, Nanoparticle, Lipid, and Polymer-based kits). Optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of proteins, DNA, and RNA molecules in vitro and in vivo. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Labs Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 4 ml (Catalog #6587)
- 30 ml (Catalog #6588)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究，药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化，可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外（癌细胞系）和体内（动物组织靶向试剂、癌细胞系）递送货物分子，包括质粒DNA，各种类型的RNA（mRNA，siRNA，shRNA，microRNA），蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发，生产和销售特定细胞系的转染试剂，用于细胞间生物分子的传递，并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物，脂质体，纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学，组合化学，和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务，包括代稳定的细胞系，细胞银行和冷冻保存，焦磷酸测序，克隆，RNA干扰（RNAi）和基因沉默服务，发展分析，siRNA文库筛选，并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生，可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择，无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务，包括设计与合成的siRNA的利益，验证siRNA的沉默效率，siRNA转染条件的优化，使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质（即RNA或DNA），通常是在生物实验室用来研究基因功能，基因表达的调节，生化映射，突变分析，和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子，这种分子，使质粒DNA（PDNA），信使RNA（mRNA），短干扰RNA（siRNA），小分子RNA（miRNA）的，并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是，无单提货的方法或转染试剂，可以适用于所有类型的细胞，细胞的细胞毒性和转染效率显着不同，取决于试剂，协议，并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子，脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂，使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应，并提供高效的siRNA转染的DNA，并在体内的蛋白质。由科学“杂志（2010年12月17日）：PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司，开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子（DNA、RNA、蛋白质）的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识，开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中，常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是，由于细胞毒性和转染效率的差异很大，并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型，因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外（癌细胞系）和体内（用于动物研究的组织靶向试剂）转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发（ELISA、IC-50、qPCR）、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系，将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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1、 配制JC-1染色工作液：
取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照：
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞：
a. 取1～6×105细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 4℃ 600g离心3～4min，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，应先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 吸除上清，用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体：
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10～100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描，激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析：
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
注意事项：
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用，但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后，才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×)，否则导致JC-1很难充分溶解，严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时，尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×，因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有一定毒性，请注意小心防护。
实验室要开展支原体检测，方法是PCR法，先要采购试剂盒，用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
公司产品通过ISO9001质量体系认证
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核心科技：自主品牌深芬仪器、中国制造、专利产品、技术保障
运输保证:优质EPE珍珠棉缓冲材料、牛皮瓦楞纸、免熏蒸木箱满足出口及国内运输要求。
售后保证:仪器免费保修一年,终身维护值得信赖！
牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定，它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质，为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年，英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。
