
USBIo全称United States BIOLOGical,位于麻省斯万普斯科特(Swampscott, MA)。全美**的抗原抗体和生化试剂供应商,目前向全球六十余个国家的科研工作者提供约50,000种抗体、抗原和生化试剂,以质量**闻名。主要产品种类包括:抗体、生化试剂、基因克隆相关产品、培养基、生长因子等细胞因子、分子生物学试剂。美国US Biological公司是生物化学和生物学试剂的专业生产商,产品服务于免疫学,分子生物学,分子遗传学,体外诊断,组织培养等科研领域。产品精确度高,质量稳定,产品数量巨大,提供70,000多种抗体、抗原和生化试剂等。
Usbio的生物化学品,抗体,重组蛋白,细胞培养基和分子生物学试剂盒几乎用于所有科学应用和环境,包括基因组研究,生物技术,药物开发和疾病诊断。USBio产品从经济实惠的研究数量到更大的批量可用于工艺开发和生产。我们的客户包括位于美国和国外的大多数*的制药和生物技术公司。
USbiological公司致力于以价值,诚信和真正的个人购买体验降低研究成本。USbiological的生物化学,抗体,重组蛋白,细胞培养基和分子生物学试剂盒几乎用于所有科学应用和环境,包括基因组研究,生物技术,药物开发和疾病诊断。产品可以从负担得起的研究数量到大批量用于工艺开发和生产。
USBio(UnitedStatesBiological,或简称USBiological)位于麻省斯万普斯科特(Swampscott,MA)。作为全美最大的抗原抗体和生化试剂供应商,USBiological目前向全球六十余个国家的科研工作者提供约150,000种抗体、抗原和生化试剂,以质量卓越闻名。主要产品种类包括:抗体、生化试剂、基因克隆相关产品、培养基、生长因子等细胞因子、分子生物学试剂。美国USBiological的产品服务于免疫学,分子生物学,分子遗传学,体外诊断,组织培养等科研领域。USBiological一直恪守“为您的研究减少成本”原则,提供高纯度、高品质的产品,并在大多数生化试剂、生物与培养基产品线上保持最高的性价比。USBiological的产品被广泛用于各种科学研究领域,包括基因组研究、生物技术、药物研发和疾病诊断等。USBiological的产品从小型科研级到生物制品大规模级规格均有提供。众多全球顶ji的生物制药和生物技术公司都在使用USBiological的高品质产品。
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1、 配制JC-1染色工作液:
取适量JC-1 Stain (200×),按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1,剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×),混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml,其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照:
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1,进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞:
a. 取1~6×105细胞,重悬于0.5ml细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 4℃ 600g离心3~4min,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞:
注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,应先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 吸除上清,用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体:
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描,激发波长为485nm,发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为485nm时,可以在475~520nm范围内设置激发波长。另外,也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析:
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm,发射光设置为530nm;检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。
注意事项:
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用,但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后,才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×),否则导致JC-1很难充分溶解,严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100个样品;对于12孔中的样品,本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时,尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右,此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×,因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂,有一定毒性,请注意小心防护。
实验室要开展支原体检测,方法是PCR法,先要采购试剂盒,用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
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牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定,它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质,为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年,英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。