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下列关于基因文库的说法中.不正确的是( ) A.某果蝇X染色体上的所有...

来自 : mayitao

货号：	556547
保存条件：	4度
供应商：	博迈斯
数量：	大量
英文名：	ANXNVFITCAPOPTOSISDTECKITI
规格：	100T

AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒说明书
一、概述
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnnexinV与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

二、试剂盒组份 (ProductcodeDescription)

货号	名称	规格	公司
556547	AnnexinV-FITCApoptosisDetectionKitI	100T	BD
Components:
556547a	AnnexinVBindingBuffer	10Xconc(51-66121E)
556547b	AnnexinV-FITC	(51-65874X)
556547c	PropidiumIodideStainingSolution	(51-66211E)

三、步骤
贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响AnnexinV的结合。
（1）用去离子水将10×BindingBuffer稀释成1×BindingBuffer；
（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与AnnexinV-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（4）加入300μL的1×BindingBuffer悬浮细胞；
（5）AnnexinV-FITC标记：加入5μL的AnnexinV-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。
（7）上机前，补加200μL的1×BindingBuffer。

四、保存：4℃保存，两个月内可保持稳定；避免反复冻融。

五、注意事项
（1）本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（2）PI（propidiumiodide，碘化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（3）AnnexinV-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（4）整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作，以免影响细胞状态。
（5）在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果。
（6）为防止荧光衰变，宜在1小时内进行流式检测。
（7）PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行AnnexinV-FITC染色，最短可在上机前5分钟再加入PI染色。

温馨提示：不可用于临床治疗。

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发布于： 2018-05-04 阅读（207）

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