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NEB/WarmStart® RTx Reverse Transcriptase/M0380S/50 reactions
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Description:
WarmStartRTxReverseTranscriptaseisauniqueinsilicodesignedRNA-directedDNApolymerasecoupledwithareversIBLy-boundaptamerthatinhibitsRTxactivitybelow40°C.ThisenzymecansynthesizeacomplementaryDNAstrandinitiatingfromaprimerusingRNA(CDNAsynthesis)orsingle-strandedDNAasatemplate.RTxisarobustenzymeforRNAdetectioninamplificationreactionsandisparticularlywellsuitedforuseinLAMP(loop-mediatedisothermalamplification).TheWarmStartpropertyenableshighthroughputapplications,roomtemperaturesetup,andincreasestheconsistencyandspecificityofamplificationreactions.RTxcontainsintactRNaseHactivity.
RT-LAMPreactionswithBst2.0WarmStartDNAPolymeraseandtheindicatedreversetranscriptasewereincubatedat65°Cwith1pg-100ngofJurkattotalRNA.Reactionsweremonitoredwithreal-timefluorescence,andtheresultingcurvesareshownonleft,withthecorrespondingthresholdtimesonright.WarmStartRTxprovidesfasterreactionthresholdtimesforimprovedconsistancyandsensitivitywithlowerinputRNAamounts.RT-LAMPreactionsperformedwithAMVReverseTranscriptaseresultedininconsistentdetection,asindicatedbywidevariationatlowerRNAinputconcentrations(bluecurves).
SensitiveDetectionwithReducedFalseNegatives
RT-LAMPreactionswereperformedwithWarmStartRTxandAMVReverseTranscriptasewithtotalRNAat6inputconcentrations.Positivedetection,indicatedbyfluorescentdetectionwithatwenty-minutereactiontime,wasachieveddownto1pgoftotalinputRNA.UseofAMVresultedinfalsenegativeswhentotalRNAwas100pgorlower.
| TotalRNA | WarmStartRTx | AMVRT |
| 100ng | 3/3 | 3/3 |
| 10ng | 3/3 | 3/3 |
| 1ng | 3/3 | 3/3 |
| 100pg | 3/3 | 2/3 |
| 10pg | 3/3 | 2/3 |
| 1pg | 3/3 | 1/3 |
RT-LAMPreactionswereperformedwithWarmStartRTxandAMVReverseTranscriptasewithtotalRNAat6inputconcentrations.Positivedetection,indicatedbyfluorescentdetectionwithatwenty-minutereactiontime,wasachieveddownto1pgoftotalinputRNA.UseofAMVresultedinfalsenegativeswhentotalRNAwas100pgorlower.
cDNAsynthesiswasperformedfor10minutesfollowedbyqPCRanalysis.ResultingCtswerenormalizedagainstbotha"noRT"controlfor0%activityandthefastestCtfor100%activity.WarmStartRTxisinhibitedbyareversibly-boundaptamerattemperaturesbelow40°C.
AvarietyofRT-LAMPtargetswereamplifiedusingBst2.0WarmStartDNAPolymeraseandtheindicatedreversetranscriptase.ReactionswithWarmStartRTxresultedinfasterthresholdtimesandmoreconsistentreactionsuccessacrossarangeoftargetsandcopynumber.
ReagentsSupplied
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| IsothermalAmplificationBufferPack | -20 | 10X |
| MagnesiumSulfate(MgSO4)Solution | -20 | 100mM |
Notes:
ReactionConditions:1XIsothermalAmplificationBuffer,template,primer,dNTPsand0.25–0.5 µlofWarmStartRTxReverseTranscriptaseinareactionvolumeof25µl.Incubateat50–55°CforcDNAsynthesisordirectlyat65°CforOne-stepRT-LAMP.蚂蚁淘电商平台
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2018-09-29
近日，一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中，来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现，免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性，文章中，研究者表示，表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 研究者Erika Bongen说道，这项研究中我们对四项独立流感挑战研究中来自全血转录组数据中的免疫细胞的比例进行了评估分析，随后对在三项队列研究中接种流感疫苗之前有症状脱落者... 查看更多
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2021-08-06
CRISPR/Cas9，RNAi等基因改造技术是最新发展起来的一种强有力的用于基因组编辑的分子生物学工具，现已广泛应用于各类动植物个体或细胞基因组的遗传学改造。为让广大从事医学、生命科学事业的人员更多的了解基因编辑实验技术方法，更高质量地完成科研任务，蚂蚁淘竭诚为您服务！基因表达调控相关技术： 1.基因过表达技术（Over expression） 2.CRISPR/Cas9 查看更多
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2021-08-03
2015年12月9日，上海启因生物在上海交通大学举办展台服务活动，活动主要推广抗性基因表达谱芯片检测服务。在本次活动中，启因生物围绕有关高通量qPCR数据分析中存在的问题以及如何高效分析，并从高通量PCR技术相关应用比如抗性基因筛选等方面入手，给大家做了系统而具体的介绍和现场答疑。尤其是土样水样等环境样品的处理做了深入交流。启因生物拥有高通量荧光定量PCR平台，可提供生物医学领域多样本多基因的表达分析，总之可为基因表达和遗传分析方面提供... 查看更多
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2018-11-18
穆斯塔法Khammash领导的研究人员已经开发出一种新方法,它使用蓝光控制DNA的转录成RNA在单个细胞。这项技术也可以用于组织工程和干细胞研究。转录是一项基本生物过程的基因复制的RNA分子。这涉及到蛋白质,包括转录因子和称为rna聚合酶的分子机器。
转录因子的转录过程开始,必须首先连接到一个特定的DNA的一部分。这触发各种流程,导致DNA的RNA聚合酶的对接。这种蛋白质复杂然后螺旋分解双螺旋为了阅读的顺序基因并将其复制到一个RNA分子。所谓的信使RNA是一种便携式拷贝基因功能的蛋白质 查看更多
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2021-09-07
转录(transcription) 也称为RNA 的生物合成，是以DNA 的一条链为模板，在DNA依赖的R NA 聚合酶( RNA polymerase) 催化下，以4 种NTP( ATP、CTP、GTP 和UTP)为原料，按碱基配对的方式合成一条RNA 分子的过程。对于有些RNA 病毒，RNA 也可以指导合成RNA。... 查看更多
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2021-08-01
会议简介"医药加学习班'已经在全国举办了几百场针对科研人员/医生/医学生普遍关注的领域,精心设计推出了多门线下学习课程学习班讲师均为相关研究领域具有丰富经验的教授/副教授/博士,授课内容贴合实际,实操性强,现场学习氛围浓烈,互动性强,授课质量高,获得几千位参会学员的一致好评.非编码 RNA 在生命调控过程中扮演着重要角色,近年来的研究成果经常入选 CNS 年度十大科学突破.目前在高等生物 中 ,存在着一个巨大的/尚... 查看更多
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2018-11-22
原核基因表达调控乳糖操纵子核心的：▪没有乳糖，基因关闭。▪有乳糖，基因被诱导开放。▪有葡萄糖时，乳糖操纵子是不表达的。结构：调节方式：阻遏蛋白的负性调节：诱导剂：别乳糖，半乳糖，IPTG;2.CAP的正性调节：两种调节方式的关系：乳糖操纵子中有2道开关：▪CAP结合到CAP位点发挥正控作用▪乳糖诱导去阻遏只有两道开关同时打开时，基因才能转录。色氨酸（trp）操纵子核心的：有色氨酸不表达，无色氨酸表达结构：结构基因是合成色氨酸的。（理解上... 查看更多
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2018-09-07
近日，一项刊登在国际杂志Genome Medicine上的研究报告中，来自斯坦福大学医学院的研究人员通过研究发现，免疫细胞的基因表达或许能够有效预测机体对流感的易感性，文章中，研究者表示，表达KLRD1的自然杀伤细胞或许能作为机体对流感易感性的特殊生物标志物。 查看更多
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2018-12-20
根据北卡罗来纳大学和加利福尼亚大学洛杉矶分校的一组科学家的说法，不同类型的幸福对人类基因组产生了惊人的不同影响。具有高水平所谓的eudaimonic福祉的人 - 在生活中具有深刻的目的和意义(Teresa母亲)带来的快乐 - 在他们的免疫细胞中显示出非常有利的基因表达谱。它们具有低水平的炎症基因表达和抗病毒和抗体基因的强烈表达。
然而，拥有相对较高的享乐幸福感的人 - 完全自我满足(名人)所带来的幸福类型 - 实际上恰恰相反。它们具有涉及高炎症和低抗病毒和抗体基因表达的不良表达谱。
在 查看更多
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2021-08-13
让基因表达分析实现高通量之原理&性能优势 一次性检测84个基因、372个基因不再是问题； 想快速找到差异样本间的差异表达基因，只要会操作qPCR，就会做这个试剂盒； 查看更多
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上海杏园瑞民生物工程有限公司在发布的Inflammasomes PCR Array 炎性小体基因表达PCR芯片供应信息，浏览与Inflammasomes PCR Array 炎性小体基因表达PCR芯片相关的产品或在搜索更多与Inflammasomes PCR Array 炎性小体基因表达PCR芯片相关的内容。 查看更多
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2018-12-01
都说熬夜对身体的损害很大，但是仍然有很多“夜猫子”不顾自己的身体健康继续熬夜。大部分人以为偶尔熬夜一次，第二天多休息会儿对健康的影响不大，可事实真的是这样吗？科学证明，“夜猫子”付出的代价远比我们所认知的还要多。Uppsala 大学的 Cedernaes 教授率领他的中国、德国和悉尼同事们对所谓“偶尔一次”的熬夜进行了深入研究，试图阐明熬夜对身体伤害的根本机制。这个研究团队的研究表明，仅仅熬夜一晚就会引发组织特异性的表观遗传、基因表达定... 查看更多
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王思民2014.7启动子与转录因子（基因表达调控蛋白）123
香粉zhby2021-08-01
生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗，不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达，表达产生的一些特殊蛋白（如转录因子、调控蛋白）反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点，涉及到生命活动的各个过程，也是各类信号通路研究无法绕过的部分。
当面对某个基因表达调控研究时，第一个想到的研究对象是什么？没错，就是基因的启动子。通过启动子区域对基因表达进行调控是最直接有效的手段，所以也是研究基因表达调控的重点。现在的基因数据库信息丰富，拿到基因及其启动子序列非常简单。那么问题又来了，拿到启动子序列以后，下一步怎么找相关的调控蛋白/转录因子呢？生物信息学方法预测？你会得到很多可能的目标调控蛋白/转录因子，还要做实验一个一个验证。凝胶迁移（EMSA），染色质免疫共沉淀（ChIP）？只能针对已知能与启动子结合的调控蛋白/转录因子，而且还需要相应探针/抗体，对于大量筛选无能为力。
美国Signosis的转录因子(结合启动子)微孔板芯片检测试剂可以方便、高效地解决这一问题。该方法专门用于筛查与特定DNA序列（通常是含有转录因子结合位点的启动子序列）相互作用的调控蛋白/转录因子，获得目的基因的启动子序列后，使用该方法可以筛查48/96种常见的调控蛋白/转录因子与启动子序列结合情况。该方法利用转录因子与特定DNA序列结合的特点，针对每一种转录因子设计相应的生物素标记探针；当混合探针与核蛋白样本共同孵育时，探针与相应的转录因子结合形成转录因子/探针复合物；除去游离的探针，收集转录因子/探针复合物；分离复合物中的DNA探针，探针的量与转录因子含量呈正相关。在探针混合物中同时加入启动子片段，如果DNA序列中含有转录因子结合位点，就会与生物素标记的探针竞争性结合转录因子，转录因子与相应探针形成的复合物减少。通过比较有无目的基因启动子片段中转录因子探针检测差异，可以分析出与无目的基因启动子片段相互作用的转录因子种类。
这种方法可以简单、快速地在48/96种常见转录因子筛选出与目的启动子片段相互作用的调控蛋白/转录因子，从而进一步探索目的基因的表达调控。待筛选的调控蛋白/转录因子都是在生命活动中起重要通的调控蛋白/转录因子，大大方便了后续的基因表调控、信号通路及其它方面的研究。
低表达的转录因子如何筛选下游基因 核酸基因技术123
xy_she2021-07-23
大家好，本人实验小白一枚，目前在寻找自己的毕业课题，有个实验问题想请教论坛里面的各位大侠。前期的实验证明某个转录因子具有抑癌作用，在正常肝脏组织中高表达，在肝癌组织中低表达，在HepG2，SMMC-7721等肝癌细胞株中缺失表达。我现在想用染色质免疫共沉淀结合高通量测序的方法筛选它的下游基因，由于在肝癌细胞株中缺失表达，我可以构建一个过表达转录因子的质粒到肝癌细胞株中做染色质免疫共沉淀吗？或者还有更好的方法筛选下游基因吗？谢谢！
...陆剑课题组揭示uORF和microRNA在基因表达调控中的共同作用_Zhang123
帆帆08162021-07-25
蛋白质在细胞中的丰度变化很大程度上决定了不同组织如脑和肌肉，以及健康和不健康人类细胞之间的差异。长期以来人们都认为转录，这一控制遗传信息从DNA流向RNA的过程，对决定细胞内蛋白质的数量起主导作用。但在过去的十年里，有许多的研究则提出RNA翻译为蛋白质的速度差异是一个更为重要的因素。
近期发表在《科学》(Science)以及其他杂志上的一些新研究证实，转录实际上是决定蛋白质丰度中最具影响力的步骤。
例如，近期来自哈佛-麻省理工Broad研究所的Marko Jovanovic等在Science杂志上发表文章，称检测了处于稳定状态和响应细菌脂多糖(LPS)时的小鼠骨髓树突细胞。他们发现在稳定状态时，mRNA水平、翻译速度和蛋白质降解速度可分别解释68%、26%和8%的蛋白质表达差异。当用LPS刺激细胞时，mRNA水平似乎可以解释90%的蛋白质表达差异，而翻译和蛋白质降解只能解释4%和6%的差异。Jovanovic等发现，在LPS处理的情况下，核糖体、线粒体以及其他一些高表达管家蛋白的翻译和蛋白质降解速度发生了更多改变，表明这两个步骤在控制一些过程中发挥了重要的作用。
来自加州大学洛杉矶分校统计学和人类遗传学助理教授Jingyi Jessica Li，和劳伦斯伯克利国家实验室的Mark Biggin，则在PeerJ杂志的一篇论文中用两种方法重新分析了2011年一项Nature研究的数据，说明了一些检测错误。他们证实采用第一种方法结果表明mRNA水平差异可以解释最小56%的蛋白质水平差异，而第二种方法表明mRNA水平可以解释84%的蛋白质表达差异，其中转录占73%，RNA降解占11%，而翻译和蛋白质降解各自仅占8%。
在3月6日，发表在Science杂志上的一篇题为“Statistics requantitates the central dogma”的文章中，Li和Biggin综述了上述这些近期的研究，得出了转录是蛋白质丰度最大贡献者这一结论。他们认为，他们自身以及近期其他一些研究工作都采用了更细致的统计学方法，来评估或是减少了实验性检测错误。Li和Biggin认为，早期的一些研究得到的有关翻译影响的结果实际上是由于实验错误所导致。
研究人员提出，科学家们精确地模拟基因表达需要采用更准确的测量和分析方法。他们的研究对于鉴别出可以有效治疗各种疾病的药物具有重要的影响。
原文链接：Statistics requantitates the central dogma
Dynamic profiling of the protein life cycle in response to pathogens
近期发表在《科学》(Science)以及其他杂志上的一些新研究证实，转录实际上是决定蛋白质丰度中最具影响力的步骤。
例如，近期来自哈佛-麻省理工Broad研究所的Marko Jovanovic等在Science杂志上发表文章，称检测了处于稳定状态和响应细菌脂多糖(LPS)时的小鼠骨髓树突细胞。他们发现在稳定状态时，mRNA水平、翻译速度和蛋白质降解速度可分别解释68%、26%和8%的蛋白质表达差异。当用LPS刺激细胞时，mRNA水平似乎可以解释90%的蛋白质表达差异，而翻译和蛋白质降解只能解释4%和6%的差异。Jovanovic等发现，在LPS处理的情况下，核糖体、线粒体以及其他一些高表达管家蛋白的翻译和蛋白质降解速度发生了更多改变，表明这两个步骤在控制一些过程中发挥了重要的作用。
来自加州大学洛杉矶分校统计学和人类遗传学助理教授Jingyi Jessica Li，和劳伦斯伯克利国家实验室的Mark Biggin，则在PeerJ杂志的一篇论文中用两种方法重新分析了2011年一项Nature研究的数据，说明了一些检测错误。他们证实采用第一种方法结果表明mRNA水平差异可以解释最小56%的蛋白质水平差异，而第二种方法表明mRNA水平可以解释84%的蛋白质表达差异，其中转录占73%，RNA降解占11%，而翻译和蛋白质降解各自仅占8%。
在3月6日，发表在Science杂志上的一篇题为“Statistics requantitates the central dogma”的文章中，Li和Biggin综述了上述这些近期的研究，得出了转录是蛋白质丰度最大贡献者这一结论。他们认为，他们自身以及近期其他一些研究工作都采用了更细致的统计学方法，来评估或是减少了实验性检测错误。Li和Biggin认为，早期的一些研究得到的有关翻译影响的结果实际上是由于实验错误所导致。
研究人员提出，科学家们精确地模拟基因表达需要采用更准确的测量和分析方法。他们的研究对于鉴别出可以有效治疗各种疾病的药物具有重要的影响。
原文链接：Statistics requantitates the central dogma
Dynamic profiling of the protein life cycle in response to pathogens
基因的表达量和转录本的表达量 组学大讲堂问答社区123
hi冰糖2018-03-04
不一样。
转录量和拷贝数是相等的（产生的RNA），但和表达量（蛋白质，最终产物）不同意思，只是表达的第一步，只有转录的也都同样顺利翻译成蛋白质才有同时满足的可能。
转录增加 不等于 表达增加表达增加 也不等于 转录增加成功转录 不代表 成功表达成功表达 说明 成功转录
基因表达(gene expression)是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。即表达=转录+翻译
转录量和拷贝数是相等的（产生的RNA），但和表达量（蛋白质，最终产物）不同意思，只是表达的第一步，只有转录的也都同样顺利翻译成蛋白质才有同时满足的可能。
转录增加 不等于 表达增加表达增加 也不等于 转录增加成功转录 不代表 成功表达成功表达 说明 成功转录
如何确定一个基因转录本能不能表达蛋白? 分子生物 综合其他...123
挚爱鱼子酱喜鎵2018-03-03
一个基因要转录并表达，需要经过mRNA，如果知道基因序列，可以采用RT-PCR的方法鉴定mRNA是否表达，如果有mRNA一般就是表达蛋白，如果没有mRNA一般不表达蛋白。
转录表达的英文_转录表达翻译_转录表达英语怎么说_海词词典123
2018-02-23
transcribe
这个词表示“将思想文字化”或是“用本国语言将外语抄写、誊录”
这个词表示“将思想文字化”或是“用本国语言将外语抄写、誊录”
基因的转录与翻译 真题练习123
llllllllklove2018-02-07
转录和翻译的模板就是基因的DNA序列,也就是说有了DNA序列,才有了某一种固定的蛋白质,即蛋白质的氨基酸序列是由DNA序列决定的.
请问:信号分子激活基因转录到表达翻译蛋白需多长时间(STAT6...123
蜗牛依依2021-08-03
请教各位，我是做在体实验，在体给予刺激30分钟后观察蛋白的表达变化，结果是蛋白表达升高，但有人质疑30分钟这么短的时间能否真的引起蛋白表达的明显变化，所以请教各位，一般蛋白从转录到表达需要多长时间？
고려해운123
qiouxianan2021-08-02
一般来说，是一个意思。因为大部分产物都是蛋白质，所以一般来说二者含义相同。
但严格来说，还是有区别的。因为基因的表达产物包括蛋白质和RNA（rRNA和tRNA）。如果产物是蛋白质，就是转录翻译；如果产物是RNA，就只是转录过程，没有翻译过程。
但严格来说，还是有区别的。因为基因的表达产物包括蛋白质和RNA（rRNA和tRNA）。如果产物是蛋白质，就是转录翻译；如果产物是RNA，就只是转录过程，没有翻译过程。
如何选择合适的转录本进行过表达研究123
zhf83822015-04-15
我刚刚开始实验遇到了一些问题，请各位帮忙想想办法：在PUBMED和UCSC网站上都找不到小鼠来源的一个基因的转录本，只有人的，但是后续实验要做干扰和过表达，我该怎么办呢？请各位想想办法，谢谢！
DNA mRNA 蛋白质 我 也无聊啦
【求助】如何研究新的调控转录因子基因表达的基因 实验方法 丁 ...123
suiyu1219852021-07-31
我请请教一下，如何验证一个转录因子在细胞内是否表达。我将细胞抽提RNA，逆转录后扩出该转录因子的基因，是否就可以表明该转录因子在该细胞内是表达的？因为是菜鸟，很多都不懂。请各位多多指教，不胜感激。
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