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제품특징
□ 특징
- 1시간만에 ng량의 RNA에서 1st strand cDNA를 효율적으로 합성- 한개의 RNA source에서 여러 종류의 유전자를 동시에 해석- Recombinant RNase inhibitor의 사용에 의해 full length cDNA 합성Advantage RT-for-PCR Kit을 사용하면 total RNA나 poly A+ RNA 중 어느것으로나 1st strand cDNA를 합성할 수 있다. Advantage RT-for-PCR Kit은 모든 RNA를 source로 하여 ng량의 RNA에서도 PCR 반응으로 충분한 양의 cDNA를 얻을 수 있다. Advantage RT-for-PCR Kit은 다음과 같은 많은 특징을 지니고 있다.- Oligo(dT) primer가 길므로 cDNA priming 효율이 향상- 재조합체의 RNase inhibitor의 사용에 의해 RNA 분해를 최소한으로 억제 각 RT-for-PCR Kit에는 PCR control primer, control RNA, user manual 등 cDNA 합성에 필요한 모든 것이 포함되어 있다.
단, PCR에 필요한 시약은 Kit에는 포함되어 있지 않으므로 별도로 준비해야 한다. high-sensitivity며 안정된 PCR 실험에는 TITANIUM Taq DNA polymerase를 사용할 것을 권장한다.
그림 1. Advantage RT-for-PCR Kit을 사용한 RT-PCR 실험에서 합성한 cDNA의 신뢰성mouse macrophage 세포주 RAW 264.7에 lipopolysaccharide 자극을 주고 iNOS mRNA 유도의 time course를 검토하였다. 그림에 표시된 시점(hr)에서 배양세포로부터 RNA를 분리한 후, 약 0.4 ㎍을 사용하여 advantage RT-for-PCR Kit으로 역전사하였다. 역전사하여 얻은 cDNA의 5 %를 주형으로 PCR 증폭을 실시하였다. Control에는 Panel A는 생쥐 G3PDH amplimer set(Cat.No. 639009), Panel B는 생쥐 iNOS primer를 사용하였다. 얻은 PCR 생성물의 20 %를 시료로 1.8 % EtBr/agarose gel로 전기영동을 실시하였다. Lane M : øX174/HaeⅢ DNA size marker.
그림 2. Advantage RT-for-PCR Kit과 2개의 타사 Kit으로 합성한 cDNA의 PCR 증폭에 따른 비교 아래에 나타낸 양의 Human lung total RNA를 사용하여 역전사 반응을 실시하였다. 역전사 반응으로 얻은 cDNA의 각 5 %씩에 대하여 Human G3PDH control amplimer set(Cat.No. 639005)를 사용하여 PCR 증폭을 실시하였다. Lane 1, 5&9 : 250 ng. Lane 2, 6&10 : 62.5 ng. Lane 3, 7&11 : 16 ng. Lane 4, 8&12 : 4 ng. Lane M : øX174/HaeⅢ DNA size marker. 4 ng의 RNA를 source로 하였을 경우, advantage RT-for-PCR Kit에서만 육안으로 보이는 명확한 PCR 생성물이 확인되었다.
□ 구성물
Oligo(dT) primerRandom hexamer primersdNTP mixtureReaction bufferRecombinant RNase inhibitorDEPC-treated H2OMMLV reverse transcriptaseHuman placenta control total RNAControl human G3PDH PCR primersUser manual(PT1107-1)
□ 보관
-70 ℃: Control total RNA-20 ℃: 이외의 모든 시약
□ 적용분야
2step RT-PCRGene expression analysis1st strand cDNA synthesisQuantitative RT-PCRRT-PCR
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