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Alzet
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通过前期的早期初筛,经过生物信息学分析,会筛选到具有统计学意义的一部分具有表达差异的蛋白。这些蛋白需要经过进一步的优化,寻找到与疾病或某些通路有关的具有表达差异的蛋白,进一步缩小蛋白范围,这时就需要使用结果更为准确的蛋白定量或鉴定工具。经过优化后,需要对得到的更小范围生物标志物进行大样本量的验证,最终确定哪些生物标志物可以用于疾病 查看更多>
蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 查看更多>
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ImmunoWay生物的使命是用更好的产品和服务来帮助世界各地的生命科学的研究者,简化并加速他们的研究。专注于开发出创新的和可靠的免疫学和细胞学产品。ImmunoWay生物是开发高品质的与癌症、细胞凋亡、细胞生长和信号转导相关的ELISA试剂盒,细胞凋亡检测试剂盒,细胞代谢检测试剂盒,抗体,抗体/蛋白芯片的先驱。公司目前有八千多种抗体,其中信号传导相关的抗体1200 查看更多>
蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 查看更多>
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wb是确诊实验。发光是初筛实验。
您好,我要做质粒转染,还有后续的荧光定量和WB,麻烦您发给我这些资料,谢谢!sweetydxg@126.com
据我所知不是所用的单克隆抗体都适合用WB来检测的。有些抗体经过SDS-PAGE后蛋白会有些变性,这部分抗原决定簇会被破坏。然后你用一抗去识别是识别不出来的,也就是印染后会没有条带的。
当然做都是可以做,需要带上阴性和阳性的对照组,以区别出是抗体制备的问题还是抗原决定簇被破坏的问题。
需要根据具体情况进行具体分析,推荐从以下角度进行分析:对细胞表达目的蛋白的时间进行梯度设计,分别取样然后做SDS-PAGEWB分析;参考实验室经验数据;尝试采用磁珠IP试剂盒产品(义翘有相关产品)进行小量样品的快速纯化;…
RT,本人打算检测某细胞株的抗凋亡能力,经文献查询应该是内源性细胞凋亡通路,所以我打算检测一下caspase9,caspase3/7,以及cleavedPARP
现在问题来了,文献中有的人是砸的western,有的是用的caspase酶活试剂盒(caspase9/3/7activitykit),我现在不知道应该选择哪种方式了......western嘛就是实验条件比较成熟,但是涉及一大堆什么totalcaspase,cleavedcaspase之类的东东;酶活试剂盒没用过,可能得慢慢摸条件....就价格来讲,两种方法花费差不多
请教各位做信号通路的大神,给我点建议吧,谢谢!
α-平滑肌肌动蛋白是23kD。
  1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西。
  2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的。WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了。然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来。如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的。
尿素,又称碳酰胺(carbamide),是由碳、氧、氨基组成的有机化合物,是一种白色晶体。最简单的有机化合物之一,是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物。也是目前含氮量最高的氮肥。作为一种中性肥料,尿素适用于各种土壤和植物。它易保存,使用方便,对土壤的破坏作用小,是目前使用量较大的一种化学氮肥。工业上用氨气和二氧化碳在一定条件下合成尿素。尿素可与酸作用生成盐。有水解作用。在高温下可进行缩合反应,生成缩二脲、缩三脲和三聚氰酸。加热至160℃分解,产生氨气同时变为异氰酸。因为在人尿中含有这种物质,所以
取名尿素。尿素含氮46%,是固体氮肥中含氮量最高的。尿素在酸、碱、酶作用下(酸、碱需加热)能水解生成氨和二氧化碳。希望我能帮助你解疑释惑。
建议起始浓度1:200开始(当然你也可以1:100,如果你的背景不高的话),倍比稀释,不是再做1:100-1:1000稀释,注意了。其实没有必要分装,一般都会添加保护剂的。如果你一定要分装,建议原液分装或是10稀释后分装。
原液分装。抗体孵育之前稀释。
做WB的浓度不一定需要很高的。可以设置简单梯度1:200;1:500;1:1000 。看结果再优化
清洗液用高纯水稀释就行样本用标准品稀释液
试剂:tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂(tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250)、预染蛋白Marker
耗材:滤纸、PVDF膜或NC膜、乳胶手套等
仪器:电泳仪、电转槽、摇床、制冰机(电转时需冰浴)等
timp可以做elisa,因为有专门的elisa试剂盒是用于检测timp,所以是可以用elisa方法进行检测的!
如题,有没有人用过SignalBoostTM免疫信号增强试剂盒,到底好不好用,效果真有说明书上说的那么好吗