
WesternBlottingHRPSubstrate
lumigenECLUltra(TMA-6)isaproprietaryacridanbasedchemiluminescentsubstrateforultra-sensitivedetectionofWesternblottedandELISAcapturedproteinsthatareboundtohorserADIshperoxidase(HRP)labeledantibodies.
- Veryrapidonsetofchemiluminescence- imagescanberecordedinseconds
- Highestsensitivity -midtolowfemtogram
- Reducedantibodyusage - morethan10-foldreductionintheusageofexpensiveantibodyconjugates
- Temperatureinsensitive - analyticalresultsareinsensitivetotemperaturesfrom22°C - 35°Creducingtheneedforprecisetemperaturecontrol
- Sustainedsignalduration - overseveralhoursallowsconvenientimaging
StableWorkingSolution
SimilartoLumigenECLExtra,LumigenECLUltrahasexcellentstABIlity.Theworkingsolutionisstableatroomtemperatureforatleast oneweekandat2-8°Cforatleast onemonth.Withthisstability,theworkingsolutioncanbepreparedandstoredforlateruse.
RapidPeakIntensity
ReactionofthesubstratewithHRPenzymegeneratesrapidluminescenceofthehighestintensitywithinseconds.Peakintensityoflightemissionoccursat440nm.
ProductSpecifications
ebiomall.com






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1. 使用预染 Marker,不过分子量不是特别准;
2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位,比如都带有 His 融合标签;
3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色,然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可,重复3次后要染30分钟。
一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.
之前是担心所需组织量不够(要求是200-300mg,我的组织只有20mg左右)才跑不出来,后来换用大鼠心脏测试,组织量绝对够。。。而且在跑western之前进行了说明书上的蛋白浓缩步骤,可是在加loADIngbuffer之后,蛋白沉淀怎么都溶解不掉~说明书也注明了如果有沉淀可以取上清继续上样,可是每次上样感觉样品往上浮,只有部分样品往孔里沉,而且跑出来什么都没有,连内参都没有。用的是β-actin的内参。。
western之前浓缩步骤如下:
1、取所得提取物,每100ul膜蛋白加入约300ul的溶解buffer和约100ul三氯乙酸(TCA)试剂,混匀后置冰上20-30min后,13000rpm,离心15min,尽可能去除上清。
2、沉淀加入1ml丙酮,室温静置10min后,13000rpm离心15min。
3、弃上清,沉淀真空旋干或置冰上干燥10min(敞开离心管盖),按适当体积比加入loadingbuffer(使用前没100ulloadingbuffer加入2-5ulβ-巯基乙醇)溶解,彻底分散(枪头反复吹吸或剧烈涡旋),煮沸5min。【注:加入loadingbuffer后如有部分难容物,可取上清继续上样。】
当然做都是可以做,需要带上阴性和阳性的对照组,以区别出是抗体制备的问题还是抗原决定簇被破坏的问题。

