货号: | JLE001L |
保存条件: | -20℃ |
英文名: | M-MLVreversetranscriptase |
保质期: | 1年 |
供应商: | 佳兰生物 |
数量: | 大量 |
规格: | 10000U |
产品说明:逆转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。MMLVReverseTranscriptase(RNaseH-)是M-MLV逆转录酶的突变型,点突变去除了RNaseH的活性中心,使RNaseH的活性降低,减少了逆转录反应中RNA的降解,使CDNA第一链的得率增加,更容易获得全长cDNA。
来源:E.coli菌株,含有突变型莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录酶基因。
产品应用:第一链cDNA的合成;RT-PCR反应。
产品纯度:200U的本酶和1μg的16S、23SrRNA在37℃下孵育1h,电泳条带无肉眼可见的变化。
推荐的反应条件:
cDNA第一链的合成
1)在无RNase的PCR管中加入:OligodT12-18(1μg/μl)或随机引物(50-250ng)1μl;TotalRNA(10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl;dNTP(10mMeach)1μl;DEPCddOH2(14-x)μl。
2)70℃保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3)离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4)向上述反应液中加入:5×RTBuffer4μl;RNasin(40U/μl)1μl;轻轻吸打混匀。
5)42℃保温2分钟(OligodT12-18或基因特异引物);如果是随机引物则25℃保温10分钟。
6)加入1μlMMLV逆转录酶,混匀后42℃保温50分钟。
7)70℃保温15分钟后置冰上冷却,得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT-PCR扩增反应,保存请置于-20℃。