
CRISPR-Cas9–mediated genome targeting:
CRISPR-Cas9 has triggered a revolution in which laboratories around the world are using the technology for innovative applications in biology. This technology is able to systematically analyze gene functions in mammalian cells, study genomic rearrangements and the progression of cancers or other diseases, and potentially correct genetic mutations responsible for inherited disorders.The CRISPR-Cas system is a prokaryotic immune system that confers resistance to foreign genetic elements such as plasmids and phages, and provides a form of acquired immunity. CRISPR spacers recognize and cut these exogenous genetic elements in a manner analogous to RNA interference in eukaryotic organisms. CRISPRs are found in approximately 40% of sequenced bacteria genomes and 90% of sequenced archaea.The CRISPR interference technique can be applied in eukaryotic cells. By delivering the Cas9 protein and appropriate guide RNAs (sgRNA) into a cell, the organism's genome can be cut at any desired location.
The Cas9 enzyme (green) generates breaks in double-stranded DNA by using its two catalytic centers to cleave each strand of a DNA target site next to a PAM sequence and matching the 20-nucleotide sequence of the single guide RNA (sgRNA).
The Transfection Reagent:
One of the most important factors that determines a successful CRISPR-Cas9–mediated genome targeting is the efficiency of delivering functional Cas9 gene and sgRNA into the cells (the transfection process). EZ Biosystems, the transfection and gene expression experts, has specifically developed the transfection reagent for CRISPR-Cas9 gene editing in mammalian cells ---- Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent:
Features:
- Specifically designed for CRISPR-Cas9 gene editing transfection in mammalian cells.
- Maximum efficiency for transfecting large plasmids (>9.0 kb)
- Great for co-transfection of large plasmids with either small plasmids or small RNA, such as sgRNA
- Great for CRISPR-Cas9 gene editing in difficult-to-transfect cells, such as primary cells, suspension culture cells, or neural cells.
EZBiosystems美国EZBiosystems™公司是一家全球性转染试剂和基因表达生产服务提供商,公司的研发宗旨是让生命科学研究变得更简单,快速,容易!该公司主要产品之一为新一代转染试剂Avalanche 系列产品,该产品集合了组合化学,分子生物学和细胞生物学技术。公司致力于开发针对不同细胞类型的专用转染试剂。公司研发团队由多个学科经验丰富的专家组成,包括组合化学、脂类化学、生物物理学、分子生物学和细胞生物学。目前,EZBiosystems™主要提供广谱性基因及siRNA体外转染试剂、体内转染试剂、生物治疗性蛋白表达专用转染试剂以及150余种细胞特异性转染试剂。
EZBiosystems特约代理EZBiosystems品牌名称:EZBiosystemsEZBiosystems品牌logo:EZBiosystems品牌官网:http://ezbiosystems.com/EZBiosystems品牌链接:http://www.annoron.com/brand-342.htmlEZBiosystems品牌介绍:EZ生物系统™是一家全球性的基因转染和基因表达产品和服务提供商。EZBiosystems™isaworldwideprovideroftransfectionandgeneexpressionproducts&services.OneofthemajorfocusesofEZBiosystems™hasbeentheresearch,development,andmanufactureofnext-generationtransfectionreagents----theAvalanche®TransfectionReagentseriesbyapplyingourexpertiseincombinatorialchemistry,molecularBIOLOGy,andcellbiology. EZBiosystems品牌相关产品:品牌货号名称规格EZ BiosystemsEZT-CRPR-1Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent0.5ml 1.5mlEZ BiosystemsEZT-OMNI-1Avalanche®-Omni Transfection Reagent0.75ml 1.5ml5*1.5mlEZ BiosystemsEZT-EVDY-1Avalanche®-Everyday Transfection Reagent0.75ml 1.5ml
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LOQ-定量限LOD-检测限
两个意义不一样啊,定性是确定你抗体是阴还是阳的,如果阳证明2个情况,一个是你感染了丙肝病毒,另一个是你曾经感染过这个病毒,现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事,不具有传染性也不是患者只是携带者;如果高于最低线那你就是患者了,就需要治疗
试剂盒里有详细的说明书,告诉你样品需要多少量,每个试剂需要加入多少量,和详细的实验步骤,一般买来就可以用,不用人教。
所以你问一个样需要多少量是没法回答的,测定过程是要加很多种试剂的。
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数,做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数,CT值越小,模版DNA的起始拷贝数越小。因此,利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
定性ELISA只能粗略表示样本待测物含量在某个特定值以上或以下,定性ELISA通常设置阳性对照(P)、和阴性对照(N),结果分别用“阴性”和“阳性”表示。ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”的判断标准是试剂盒所确定的阳性判断值,即cut-off值。
定量ELISA是通过一系列不同已知浓度的标准品所对应的OD值做出标准曲线,然后将样本的OD值代入标准曲线,计算出样本中待测物的含量。百特纯大分子Meretciel的定量ELISA试剂盒还可以。
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。

