The DNA Fragmentation Kit is designed to performrandom genomic DNA fragmentation and other long-chain dsDNA fragmentationvia enzymatic treatment followed by blunting of the resulting DNA fragments. The kitdoes not requirean additional physical shearing step using an apparatus such as a sonicator. Blunt-end DNA fragments may be ligated with blunt-end vectors. If blunting is not required, the reaction may be stopped after DNA fragmentation is complete. The kit may also be used to pretreat samples enrichedwith methylated DNA and to prepare DNA samples for sequencing.
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1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
定性ELISA只能粗略表示样本待测物含量在某个特定值以上或以下,定性ELISA通常设置阳性对照(P)、和阴性对照(N),结果分别用“阴性”和“阳性”表示。ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”的判断标准是试剂盒所确定的阳性判断值,即cut-off值。
定量ELISA是通过一系列不同已知浓度的标准品所对应的OD值做出标准曲线,然后将样本的OD值代入标准曲线,计算出样本中待测物的含量。百特纯大分子Meretciel的定量ELISA试剂盒还可以。
加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数,做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数,CT值越小,模版DNA的起始拷贝数越小。因此,利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证.pdf(17431.6k)
1.模板提取(一般为RNA):Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定:分光光度计或NanoDrop
3.逆转录:逆转录试剂盒(或者一步法试剂盒),这一步可以用普通PCR做,也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂:通常有用SYBR Green Mix做的,但是这里建议你用EvaGreen做,灵敏度和平行性都要好于SYBR Green,并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他:除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板(Axygen反应比较好)、移液枪等,暂时就想到这么多。
至少可以说同一种蛋白定量试剂盒并不适用于所有细胞
蛋白定量试剂盒有分Bradford,BCA,Lowry等,每一种对不同的细胞都有独特的适用范围和灵敏度。所以需要多种蛋白定量试剂盒对比检测才能让结果准确

