| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 650/None |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | SmallMoleculeDetection DiagnosticMolecules |
| Related | CellMetabolism BiochemicalAssays |
1. PrepareserialdilutionsofAmmoniumChloride(0to1mM)solutions:
1.1 Add1μLof1.0MAmmoniumChlorideStandard(ComponentC)to999µLDPBStogenerate1.0mMstandard
ammoniumchloridesolution.
1.2 Take300μLof1.0mMstandardtoperform1:3serialdilutionstoget300,100,30,10,3,1,and0µMstandard
ammoniumchloridesolutions.
1.3 AddAmmoniumChlorideStandardsandammoniacontainingtestsamplesintoa96-wellclearbottommicroplateasdescribedinTables1and2.
Table1.Layoutofstandardsandtestsamplesinaclearbottom96-wellmicroplate:
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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AS1 | AS1 | …. | …. | …. | …. |
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AS2 | AS2 |
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AS3 | AS3 |
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AS4 | AS4 |
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AS5 | AS5 |
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AS6 | AS6 |
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AS7 | AS7 |
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Note:AS=AmmoniumChlorideStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.
Table2.Reagentcompositionforeachwell:
AmmoniumChlorideStandard | BlankControl | TestSample |
Serialdilutions*:50μL | DPBS:50μL | 50μL |
*Note:Addtheseriallydilutedammoniumchloridestandardsfrom1to1000µMintowellsfromAS1toAS7induplicate.
2. RunAmmoniumChlorideAssay:
2.1 Add50μLofAssayBufferI(ComponentA)toeachwelloftheAmmoniumChlorideStandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep1.3)sothatthetotalassayvolumeis100µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLsample,25μLofAssayBufferIperwell.
2.2 Incubatethereactionfor5minutesatroomtemperature.
2.3 Add50μLofAssayBufferII(ComponentB)toeachwellsothatthetotalassayvolumeis150µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLAssayBufferII(ComponentB)toeachwell.
2.4 Incubateatroomtemperaturefor30-60minutes,andmonitortheabsorbanceincreaseat660-670nmusinganabsorbancemicroplatereader.
Note:ThecolorturnstoyellowafterAssayBufferII(ComponentB)isadded,andthewellswithAmmoniumChlorideStandardorsampleswillshowbluishgreencolorafterincubation.Theintensityofthecolorwillreachthemaximumin30-60minutes.
| References&Citations |  PrinterFriendlyVersion |
1. LohTP,TanKM,ChewS,ChanDS.(2013)Highpleuralammonianegativelyinterfereswiththemeasurementofadenosinedeaminaseactivity.BMJCaseRep,2013.
2. BakLK,WaagepetersenHS,SorensenM,OttP,VilstrupH,KeidingS,SchousboeA.(2013)Roleofbranchedchainaminoacidsincerebralammoniahomeostasisrelatedtohepaticencephalopathy.MetabBrainDis.
3. TranahTH,VijayGK,RyanJM,ShawcrossDL.(2013)Systemicinflammationandammoniainhepaticencephalopathy.MetabBrainDis,28,1.
4. HenryRP,LucuC,OnkenH,WeihrauchD.(2012)Multiplefunctionsofthecrustaceangill:osmotic/ionicregulation,acid-basebalance,ammoniaexcretion,andbioaccumulationoftoxicmetals.FrontPhysiol,3,431.
5. RothmanDL,DeFeyterHM,MaciejewskiPK,BeharKL.(2012)Isthereinvivoevidenceforaminoacidshuttlescarryingammoniafromneuronstoastrocytes?NeuRochemRes,37,2597.
6. StahlDA,delaTorreJR.(2012)Physiologyanddiversityofammonia-oxidizingarchaea.AnnuRevMicrobiol,66,83.
7. ShenJP,ZhangLM,DiHJ,HeJZ.(2012)Areviewofammonia-oxidizingbacteriaandarchaeainChinesesoils.FrontMicrobiol,3,296.
8. WrightPA,WoodCM.(2012)Seventhingsfishknowaboutammoniaandwedon"t.RespirPhysiolNeurobiol,184,231.
9. RoseCF.(2012)Ammonia-loweringstrategiesforthetreatmentofhepaticencephalopathy.ClinPharmacolTher,92,321.
10. deVilliersM,PuthanVeetilV,RajH,deVilliersJ,PoelarendsGJ.(2012)Catalyticmechanismsandbiocatalyticapplicationsofaspartateandmethylaspartateammonialyases.ACSChemBiol,7,1618.
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
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1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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谢谢谢
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
两个意义不一样啊，定性是确定你抗体是阴还是阳的，如果阳证明2个情况，一个是你感染了丙肝病毒，另一个是你曾经感染过这个病毒，现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事，不具有传染性也不是患者只是携带者；如果高于最低线那你就是患者了，就需要治疗
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
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5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
