| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 510/524 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | CellBIOLOGy CellMetabolism |
| Related | RedoxEnzymes BiochemicalAssays |
| Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
1.PrepareCoAstandardstocksolution:
Add200µLofddH2OintotheCoAstandardvial(ComponentC)tomake1mM(1nmol/µL)stocksolution.
Note1:ItishighlyrecommendedtousetheddH2OthathasbeenspargedwithnitrogentoremoveoxygenforpreparingcoenzymeAstocksolution.
Note2:Theaqueoussolutionisnotstable,willdegraderapidly.Itshouldbestoredat2-8oCandusedwithin1day.
2.Prepare100XCoAGreen™stocksolution:
Add100µLofDMSO(ComponentD)intothevialofCoAGreen™(ComponentA)tomake100Xstocksolution.
Note:TheunusedCoAGreen™stocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquots,storedat-20oCandkeptfromlight.
3.PrepareCoAAssaymixture:
Add50µLof100XCoAGreen™stocksolution(fromStep2)into5mLofAssayBuffer(ComponentB),andmixthemwell.
4.PrepareserialdilutionsofCoAstandard(0to30μM):
4.1 Add30μLofCoAstandardstocksolution(fromStep1)to970µLofAssayBuffer(ComponentB)togenerate30µM(30pmol/µL)CoAstandard.
Note:DilutedCoAstandardsolutionisunstable,andshouldbeusedwithin4hours.
4.2 Take200μLof30μMCoAstandardsolutiontoperform1:3serialdilutionswithAssaybuffer(ComponentB)toget10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01and0μMserialdilutionsofCoAstandard.
4.3 AddCoAstandardsandCoA-containingtestsamplesintoasolidblack96-wellmicroplateasshowninTables1and2.
Note:Treatcellsortissuesamplesasdesired.
Table1:LayoutofCoAstandardsandtestsamplesinasolidblack96-wellmicroplate
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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CoA1 | CoA1 | …. | …. | …. | …. |
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CoA2 | CoA2 |
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CoA3 | CoA3 |
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CoA4 | CoA4 |
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CoA5 | CoA5 |
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CoA6 | CoA6 |
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CoA7 | CoA7 |
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Note:CoA=CoAStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.
Table2:Reagentcompositionforeachwell
CoAStandard | BlankControl | TestSample |
SerialDilutions*:50μL | AssayBuffer:50μL | 50μL |
*Note:AddtheserialdilutionsofCoAstandardfrom0.01μMto10μMintowellsfromCoA1toCoA7induplicate.
5.RunCoAassay:
5.1 Add50μLofCoAreactionmixture(fromStep3.1)toeachwelloftheCoAstandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep4.3)tomakethetotalCoAassayvolumeof100µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLofsampleand25μLofCoAreactionmixtureintoeachwell.
5.2 Incubatethereactionatroomtemperaturefor10minutesto1hour,protectedfromlight.
5.3 MonitorthefluorescenceincreaseatEx/Em=490/520nmwithafluorescenceplatereader.
| References&Citations |  CitationExplorer |
MethodsformeasuringCoAandCoAderivativesinbiologicalsamples
Authors:YugoTsuchiya,UyenPham,IvanGout
Journal:BiochemicalSocietyTransactions(2014):1107--1111
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
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AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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试剂盒里有详细的说明书，告诉你样品需要多少量，每个试剂需要加入多少量，和详细的实验步骤，一般买来就可以用，不用人教。
所以你问一个样需要多少量是没法回答的，测定过程是要加很多种试剂的。
加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
LOQ-定量限LOD-检测限
至少可以说同一种蛋白定量试剂盒并不适用于所有细胞
蛋白定量试剂盒有分Bradford，BCA，Lowry等，每一种对不同的细胞都有独特的适用范围和灵敏度。所以需要多种蛋白定量试剂盒对比检测才能让结果准确
如果要是直接注射，就不知道了
现在跑tricine－sds－page电泳老是跑不好，
我刚做了bradford定量，
觉得差异与空菌对照还是挺明显的，
但是这个方法只能初略的估计，
还是不能精确定量，
做HPLC我现在还没有条件，
所以我想能不能用BCA或者lowry法先进行定量啊？
这种方法如果做出来结果的话，
能不能发个sci之类的文章啊？
希望高手们指点一下！
谢谢了
