| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 490/515 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | ProteinBiochemistry Generalproteins |
| Related | BiochemicalAssays |
1.Prepare500XMaleimideGreen™stocksolution:
Add20µLofDMSO(ComponentE)intotheMaleimideGreenvial(ComponentA)tomake500Xstocksolution.
Note:10µLofthestocksolutionisenoughforone96-wellplate.TheunusedMaleimideGreen™stocksolutionshouldbedividedintosingleusealiquots,storedat-20oCandkeptfromlight.
2.Prepare20Xmaleimidereactionmixture:
Add10µLof500XMaleimideGreen™stocksolution(fromStep1)into250µLReactionBuffer(fromComponentB),andmixthemwell.Incubatethe20Xmaleimidereactionmixtureatroomtemperaturefor30min,protectedfromlight.
Note1:Itisveryimportanttoincubatethe20Xmaleimidereactionmixtureatroomtemperatureforatleast30mintomaximizethesignaltobackgroundratio.
Note2:YoushouldseetheyellowcolorafteraddingtheMaleimideGreen™stocksolutionintoreactionbuffer.
3.Preparemaleimideassaymixture:
Addthewholecontentsof20Xmaleimidereactionmixture(260µLfromStep2)into5mLofassaybuffer(ComponentC),andmixwell.
Note:Thismaleimideassaymixtureisnotstable.Usewithin1hour.
4.PrepareserialdilutionsofN-ethylaleimidestandard(0to10μM):
4.1 Add10μLof10mM(10nmol/µL)N-ethylmaleimidestandardstocksolution(ComponentD)to990µLofassaybuffer(ComponentC)togenerate100µM(100pmol/µL)N-ethylmaleimidestandardsolution.
Note:Theunused10mMN-ethylmaleimidestandardsolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20oC.
4.2 Take200μLof100μMN-ethylmaleimidestandardsolution(fromStep4.1)toperform1:3serialdilutionstoget30,10,3,1,0.3,0.1and0μMserialdilutionsofN-ethylmaleimidestandard.
4.3 AddN-ethylmaleimidestandardsandmaleimide-containingtestsamplesintoasolidblack96-wellmicroplateasdescribedinTables1and2
Table1.LayoutofN-ethylmaleimidestandardsandtestsamplesinasolidblack96-wellmicroplate
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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MS1 | MS1 | …. | …. | …. | …. |
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MS2 | MS2 |
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MS3 | MS3 |
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MS4 | MS4 |
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MS5 | MS5 |
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MS6 | MS6 |
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MS7 | MS7 |
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Note:MS=N-ethylmaleimideStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.
Table2.Reagentcompositionforeachwell
N-ethylmaleimideStandard | BlankControl | TestSample |
SerialDilutions*(50μL) | AssayBuffer:50μL | 50μL |
*Note:AddtheserialdilutionsofN-ethylmaleimidestandardfrom0.1μMto100μMintowellsfromMS1toMS7induplicate.
5.Runmaleimideassay:
5.1 Add50μLofmaleimideassaymixture(fromStep3)toeachwelloftheN-ethylmaleimidestandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep4.3)tohavethetotalmaleimideassayvolumeof100µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLofsampleand25μLofmaleimidereactionmixtureintoeachwell.
5.2 Incubatethereactionmixturefor5to30minutesatroomtemperature,protectedfromlight.
Note:Forbestresults,thefluorescenceintensityshouldbereadwithin30minutesduetothefactthatthefluorescencebackgroundincreaseswithtime.
5.3 MonitorthefluorescenceincreasewithafluorescenceplatereaderatEx/Em=490/520nm.
| References&Citations |  CitationExplorer |
Conjugationwithaninulin-chitosanadjuvantmarkedlyimprovestheimmunogenicityofMycobacteriumtuberculosisCFP10-TB10.4fusionprotein
Authors:WeiliYu,TaoHu
Journal:MolecularPharmaceutics(2016)
ModeratePEGylationofthecarrierproteinimprovesthepolysaccharide-specificimmunogenicityofmeningococcalgroupApolysaccharideconjugatevaccine
Authors:TingtingZhang,WeiliYu,YanfeiWang,TaoHu
Journal:Vaccine(2015):3208--3214
Rapidquantificationofmaleimideinbioconjuatedsamplesusinganovelcolorimetricmethod(TECH2P.761)
Authors:JinfangLiao,HaitaoGuo,ZhenLuo,QinZhao,JackDiwu
Journal:TheJournalofImmunology(2015):206--7
Successfulacquisitionofaneutralizingmonoclonalantibodyagainstanovelneutrophil-activatingpeptide,mitocryptide-1
Authors:TatsuyaHattori,KentaNakashima,TakayukiMarutani,YoshiakiKiso,YoshisukeNishi,HidehitoMukai
Journal:Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications(2015):54--59
CD133-targetedpaclitaxeldeliveryinhibitslocaltumorrecurrenceinamousemodelofbreastcancer
Authors:SureshKumarSwaminathan,EmilieRoger,UdayaToti,LinNiu,JohnROhlfest,JayanthPanyam
Journal:JournalofControlledRelease(2013):280--287
PEGasaspacerarmmarkedlyincreasestheimmunogenicityofmeningococcalgroupYpolysaccharideconjugatevaccine
Authors:QingruiHuang,DongxiaLi,AijunKang,WenqiAn,BeiFan,XiaoweiMa,GuanghuiMa,ZhiguoSu,TaoHu
Journal:JournalofControlledRelease(2013):382--389
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
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1.步骤简单，45分钟内完成测定，比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
两个意义不一样啊，定性是确定你抗体是阴还是阳的，如果阳证明2个情况，一个是你感染了丙肝病毒，另一个是你曾经感染过这个病毒，现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事，不具有传染性也不是患者只是携带者；如果高于最低线那你就是患者了，就需要治疗
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
谢谢谢
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)；
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)；
(3)酶的底物；
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)；
(5)结合物及标本的稀释液；
(6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
(7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用3mol/L。向左转|向右转
临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证.pdf(17431.6k)
