| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 551/577 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | SmallMoleculeDetection MetalIons |
| Related | DiagnosticMolecules BiochemicalAssays |
Note:Thawallthekitcomponentstoroomtemperaturebeforestartingtheexperiment.
1.Preparestocksolutions:
Prepare200XRhodRed™stocksolutionbyadding50µLofsterileH2OintothevialofRhodRed™Indicator(ComponentA).Thestocksolutionshouldbeusedpromptly.Anyremainingsolutionneedstobealiquotedandrefrozenat-20oC.
2.Prepareassayreactionmixture:
Prepareassayreactionmixtureaccordingtothefollowingtable,keptfromlight.
Table1.Assayreactionmixtureforone96-wellplate
Components | Volume |
RhodRed™stocksolution(200X,fromStep1) | 25μL |
AssayBuffer(ComponentB) | 5mL |
TotalVolume | 5.025mL |
Table2.Layoutofcalciumstandardsandtestsamplesinasolidblack96-wellmicroplate
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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CS1 | CS1 | …. | …. | …. | …. |
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CS2 | CS2 |
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CS3 | CS3 |
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CS4 | CS4 |
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CS5 | CS5 |
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CS6 | CS6 |
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CS7 | CS7 |
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Note:CS=CalciumStandards,BL=BlankControl,TS=TestSamples.
Table3.Reagentcompositionforeachwell
CalciumStandard | BlankControl | TestSample |
Serialdilutions*:50μL | H2O:50μL | 50μL |
*Note:Addtheseriallydilutedcalciumstandardsfrom3mMto0.003mMintowellsfromCS1toCS7induplicate.
3.RunCalciumassay:
3.1 Prepareacalciumstandardbydilutingtheappropriateamountofthe300mMCalciumStandard(ComponentC)intoH2OtoproduceaCalciumconcentrationrangingfrom0to3mM(12mg/dL).A0 mMcalciumcontrolisincludedasblankcontrol.Thefinalcalciumconcentrationswillbetwofoldslower(i.e.,0to1.5mM)withtheadditionofassayreactionmixture(SeeStep3.3).
3.2 Add50μLofserialdilutedcalciumstandard(fromStep3.1)intoeachwell.
3.3 Add50μLofassayreactionmixture(fromStep2,Table1)toeachwellofcalciumstandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep2,Table3)tomakethetotalcalciumassayvolumeof100µL/well.
Note:Fora384-wellplate,add25μLofsampleand25μLofassayreactionmixtureintoeachwell.
3.4 Incubatethereactionfor5to30minutesatroomtemperature,protectedfromlight.
3.5 MonitorthefluorescenceintensitywithafluorescenceplatereaderatEx/Em=540/590nm.
| References&Citations |  CitationExplorer |
Highefficiencysingle-stepBiomaterial-basedmicroparticlefabricationviatemplate-directedsupramolecularcoordinationchemistry
Authors:KwokKeiLai,ReinhardRenNEBerg,WingCheungMak
Journal:GreenChemistry(2016):1715--1723
Microcystin-LRcausessexualhormonedisturbanceinmaleratbytargetinggonadotropin-releasinghormoneneurons
Authors:XuetingWang,JieDing,ZouXiang,PeipeiJiang,JingDu,XiaodongHan
Journal:Toxicon(2016):45--55
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
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AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
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谢谢谢
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
两个意义不一样啊，定性是确定你抗体是阴还是阳的，如果阳证明2个情况，一个是你感染了丙肝病毒，另一个是你曾经感染过这个病毒，现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事，不具有传染性也不是患者只是携带者；如果高于最低线那你就是患者了，就需要治疗
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
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4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
