| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 575/None |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | SmallMoleculeDetection DiagnosticMolecules |
| Related | GlucoseTransporters BiochemicalAssays |
| Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
1.Preparestocksolutions:
1.1 250XAmplite™Redstocksolution:Add100µLofDMSO(ComponentE)intothevialofAmplite™Redsubstrate(ComponentA).Thestocksolutionshouldbeusedpromptly.Anyremainingsolutionshouldbealiquotedandrefrozenat-20oC.
Note1:Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
Note2:TheAmplite™Redsubstrateisunstableinthepresenceofthiolssuchasdithiothreitol(DTT)and2-mercaptoethanol.ThefinalconcentrationofDTTor2-mercaptoethanolinthereactionshouldbenohigherthan10μM.TheAmplite™RedsubstrateisalsounstableathighpH(>8.5).Therefore,thereactionshouldbeperformedatpH7–8.Theprovidedassaybuffer(pH7.4)isrecommended.
1.2 10U/mLHRPstocksolution:Add1mLofassaybuffer(ComponentB)intothevialofhorseradishperoxidase(ComponentC).
Note:TheunusedHRPsolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20oC.
1.3 100U/mLglucoseoxidasesolution:Add1mLofassaybuffer(ComponentB)intothevialofglucoseoxidase(ComponentD).
Note:Theunusedglucoseoxidasesolutionshouldbedividedintosingleusealiquotsandstoredat-20oC.
1.4 800mMglucosestocksolution:Add1mLofassaybuffer(ComponentB)intothevialofglucose(ComponentF).
Note:Theunusedglucosesolutionshouldbestoredat-20oC.
2.Prepareassayreactionmixture:
PrepareAssayreactionmixtureaccordingtothefollowingtables,protectedfromlight.
Table1Assayreactionmixtureforoneclearbottom96-wellmicroplate(2X)
Components | Volume |
250XAmplite™RedStockSolution(fromStep1.1) | 20μL |
10U/mLHRPStockSolution(fromStep1.2) | 100μL |
100U/mLGlucoseOxidaseSolution(fromStep1.3) | 100μL |
AssayBuffer(ComponentB) | 4.78mL |
Totalvolume | 5mL |
Table2Layoutofglucosestandardsandtestsamplesinaclearbottom96-wellmicroplate
BL | BL | TS | TS | …. | …. |
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GS1 | GS1 | …. | …. | …. | …. |
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GS2 | GS2 |
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GS3 | GS3 |
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GS4 | GS4 |
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GS5 | GS5 |
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GS6 | GS6 |
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GS7 | GS7 |
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Note:GS=Glucosestandards,BL=Blankcontrol,TS=testsamples.
Table3.Reagentcompositionforeachwell
GlucoseStandard | BlankControl | TestSample |
SerialDilutions*:50μL | AssayBuffer(ComponentB):50μL | 50μL |
*Note:Addtheseriallydilutedglucosestandardsfromapproximately1.6µMto100µMintoeachwellfromGS1toGS7induplicate.
3.RunGlucoseassay:
3.1 Prepareaglucosestandardbydilutingtheappropriateamountofthe800mMglucosestocksolution(fromStep1.4)intoassaybuffer(ComponentB)toproduceglucoseconcentrationsof100μM.Thenperform1:2serialdilutionsinassaybuffer(ComponentB)togetapproximately50,25,12.5,6.3,3.1and1.6μMseriallydilutedglucosestandards.Anon-glucosebuffercontrolisincludedasblankcontrol.
3.2 Add50μLofassayreactionmixture(fromStep2)intoeachwellofglucosestandard,blankcontrol,andtestsamples(seeStep2,Table3)tomakethetotalglucoseassayvolumeof100µL/well
Note:Fora384-wellplate,add25μLofsampleand25μLofassayreactionmixtureintoeachwell.
3.3 Incubatethereactionfor10to30minutesat37oC,protectedfromlight.
3.4 MonitortheabsorbanceincreasewithanabsorbanceplatereaderatOD=570nm.
| References&Citations |  CitationExplorer |
MicroRNAsregulategeneplasticityduringcoldshockinzebrafishlarvae
Authors:I-ChenHung,Yu-ChuanHsiao,HSunnySun,Tsung-MingChen,Shyh-JyeLee
Journal:BMCgenomics(2016):922
Glucosemetabolismandgeneexpressioninjuvenilezebrafish(Daniorerio)challengedwithahighcarbohydratediet:effectsofanacuteglucosestimulusduringlateembryoniclife
Authors:FilipaRocha,JorgeDias,SofiaEngrola,PauloGavaia,IngeGeurden,MariaTeresaDinis,StephanePanserat
Journal:BritishJournalofNutrition(2015):403--413
Glucoseoverloadinyolkhaslittleeffectonthelong-termmodulationofcarbohydratemetabolicgenesinzebrafish(Daniorerio)
Authors:FilipaRocha,JorgeDias,SofiaEngrola,PauloGavaia,IngeGeurden,MariaTeresaDinis,StephanePanserat
Journal:JournalofExperimentalBiology(2014):1139--1149
ImpactofL-FABPandglucoseonpolyunsaturatedfattyacidinductionofPPARα-regulatedβ-oxidativeenzymes
Authors:AncaDPetrescu,HuanHuang,GregoryGMartin,AveryLMcIntosh,StephenMStorey,DaniloLandrock,AnnBKier,FriedhelmSchroeder
Journal:AmericanJournalofPhysiology-GastrointestinalandLiverPhysiology(2013):G241--G256
InhibitorsoffattyacidsynthesisinducePPARα-regulatedfattyacidβ-oxidativegenes:synergisticrolesofL-FABPandglucose
Authors:HuanHuang,AveryLMcIntosh,GregoryGMartin,AncaDPetrescu,KerstinKLandrock,DaniloLandrock,AnnBKier,FriedhelmSchroeder
Journal:PPARresearch(2013)
Aquaporin-9proteinistheprimaryrouteofhepatocyteglyceroluptakeforglycerolgluconeogenesisinmice
Authors:SABInaJelen,SörenWacker,CamiloAponte-Santamaría,MartinSkott,AleksandraRojek,UrbanJohanson,PerKjellbom,SørenNielsen,BertLdeGroot,MichaelRützler
Journal:JournalofBiologicalChemistry(2011):44319--44325
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
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AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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谢谢谢
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
两个意义不一样啊，定性是确定你抗体是阴还是阳的，如果阳证明2个情况，一个是你感染了丙肝病毒，另一个是你曾经感染过这个病毒，现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事，不具有传染性也不是患者只是携带者；如果高于最低线那你就是患者了，就需要治疗
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
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4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
