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제품특징
□ Marathon®-Ready cDNA for RACE
● RACE PCR을 위해 adaptor가 연결되어 있는 cDNA
● Human, mouse, rat의 매우 다양한 조직과 세포로부터 합성된 cDNA
Marathon-Ready cDNA는 고품질의 프리미엄 poly A+ RNA로부터 합성된 cDNA로 곧바로 5、- RACE PCR이나 3、-RACE PCR을 수행할 수 있도록 Marathon Adaptor를 붙여 놓은 cDNA이다 (1). 각각의 Marathon Ready cDNA는 full-length gene이 유전자 특이적 primer에 의해 증폭될 수 있도록 조직 특이적(tissue-specific)인 double-strand cDNA 의 "pool"로 이루어진 제품이다. 또한, 본 제품은 조직 특이적인 유전자 발현 연구나 mRNA의 다형성 연구, 그리고 복수 유전자 군에 속한 특정 mRNA 연구에 사용할수 있다.Marathon-Ready cDNA는 프리미엄 RNA로부터 3、-이질성 (heterogeneity)을 제거하고 full-length cDNA를 합성하기 위해 최적화된 실험방법을 이용하여 합성되었다 (2, 3). 합성 후 양 말단이 평활화되며 Marathon Adaptor는 double-strand cDNA의 양쪽 끝에 붙게 된다.각각의 Marathon-Ready cDNA는 30회 사용분량 (농도~ 0.1 ng/μl) 으로 adaptor primer, nested adaptor primer, 5、과 3、G3PDH control primer가 포함되어 있다. Marathon-Ready cDNA User Manual (PT1156-1)은 www.clontech.com/manuals에서 다운로드 받을 수 있다. Marathon-Ready cDNA를 이용한 5、- RACE와 3、-RACE 실험에는 각자의 유전자 특이적 primer가 필요하고, PCR 반응을 위한 효소를 별도로 구매하여야 한다(Advantage 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639201 & 639202) 추천).
Figure 1. Generation of full-length cDNA by end-to-end amplification from adaptor-ligated ds cDNA. RACE PCR was performed. The template for Lanes 1- 3 was Marathon-Ready Human Placenta cDNA (Cat. No.639311); the template for Lanes 4 & 5 was Marathon-Ready Human Skeletal Muscle cDNA (Cat. No. 639313). Lane 1: 5’-RACE product for TFR cDNA. Lane 2: 3’-RACE product for TFR cDNA. Lane 3: full-length TFR cDNA (5.1 kb) generated by end-to-end amplification using 5’ and 3’ TFR primers. Lane 4: nearly full-length IGFR2 cDNA (8.8 kb) amplified with 5’ IGFR2 and 3’ IGFR2 primers. Lane 5: full-length IGFR1 cDNA (5.0 kb) amplified with primers 5’-IGFR and 3’-IGFR. Lane M: 1-kb DNA size ladder.
Figure 2. Marathon RACE products obtained using G3PDH primers to amplify Marathon-Ready Human, Mouse, and Rat Heart cDNAs. RACE PCR was performed using the AP1 primer and the positive control G3PDH primers. The templates used were Marathon-Ready Human Heart (Cat. No. 639304), Mouse Heart (Cat. No. 639404), and Rat Heart (Cat. No.639416) cDNAs. Lane M: 1-kb DNA size ladder.
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