- MK-8776 (SCH-900776)
- Quizartinib (AC220)
- LY2603618
- CHIR-98014
- TCS 359
- Amuvatinib (MP-470, HPK 56)
| CHIR-124Chk1 inhibitor,novel and potent |
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Nature.2017 Jan 19;541(7637):417-420.
Nature.2018 Nov;563(7731):407-411.Nature.2018 Jun 13.Nature.2018 Jun 27.Nature.2018 Mar 29;555(7698):673-677.Nature.2017 Sep 7;549(7670):96-100.Nature.2016 Apr 21;532(7599):398-401.
Science.2016 Aug 5;353(6299)594-8Nat Nanotechnol.2017 Dec;12(12):1190-1198.Nature Biotechnology.2017 Jun;35(6):569-576Nat Med.2018 Sep 17.Cell.2018 Dec 21. pii: S0092-8674(18)31561-7.Cell.Available online 25 October 2018.Cell.2018 Sep 27. pii: S0092-8674(18)31183-8.Cell.2018 Jun 28;174(1):172-186.e21.Cell.2018 Feb 22;172(5):1007-1021.e17.Cell.2017 Nov 30;171(6):1284-1300.e21.Cell.2017 Aug 17. pii: S0092-8674(17)30869-3.Cell.2017 Jul 13;170(2):312-323Nat Med.2018 Jan 29.Nat Med.2017 Nov;23(11):1342-1351.Cell.2017 Apr 6;169(2):286-300.Cell.2015 Aug 27;162(5):987-1002.Cell.2015 Feb 12;160(4):729-44.Nature Medicine.2017 Apr;23(4):493-500.Cancer Cell.2018 May 14;33(5):905-921.e5.Cancer Cell.2018 Apr 9;33(4):752-769.e8.Cancer Cell.2018 Mar 12;33(3):401-416.e8.Cancer Cell.2017 Aug 14;32(2):253-267.e5.Nat Methods.2018 Jul;15(7):523-526.Cell Stem Cell.2018 May 3;22(5):769-778.e4.Cell Stem Cell.2017 Nov 20. pii: S1934-5909(17)30375-2.Quality Control & MSDS
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- HPLC
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Chemical structure
| Description | CHIR-124 is a novel and potent inhibitor of Chk1 with an IC50 value of 0.3 nM. | |||||
| Targets | Chk1 | FLT3 | PDGFR | GSK-3 | Fyn | |
| IC50 | 0.3 nM | 5.8 nM | 6.6 nM | 23.3 nM | 98.8 nM | |
CHIR-124 Dilution Calculator
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CHIR-124 Molarity Calculator
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| Cas No. | 405168-58-3 | SDF | Download SDF |
| Chemical Name | 4-[[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]amino]-6-chloro-3-(1,3-dihydrobenzimidazol-2-ylidene)quinolin-2-one | ||
| Canonical SMILES | C1CN2CCC1C(C2)NC3=C4C=C(C=CC4=NC(=O)C3=C5NC6=CC=CC=C6N5)Cl | ||
| Formula | C23H22ClN5O | M.Wt | 419.91 |
| Solubility | ≥10.5mg/mL in DMSO | Storage | Store at -20°C |
| Physical Appearance | A solid | Shipping Condition | Evaluation sample solution : ship with blue ice.All other available size:ship with RT , or blue ice upon request |
| General tips | For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.Stock solution can be stored below -20℃ for several months. | ||
CHIR-124, a selective inhibitor, inhibits Chk1 with IC50 value of 0.3nM 2,000-fold more potently than Chk2 with IC50 value of 0.7μM. CHIR-124 also potently targets other kinases such as PDGFR with IC50 value of 6.6nM and FLT3 with IC50 value of5.8nM [1].
CHIR-124 abrogates the S and G2-M checkpoints induced by topoisomerase I poisons and selectively sensitizes tumors lacking p53 function to undergo mitotic death. In addition, CHIR-124 enhances the antitumor effect of irinotecan in tumor xenografts by inhibiting the G2-M checkpoint and inducing apoptosis.
In vitro, the effect of a matrix of camptothecin and CHIR-124 combinations in a number of human cancer cell lines, including breast carcinoma (MDA-MB-231and MDAMB-435) and colon carcinoma (SW-620 and Colo205), all of which are mutant for p53. When cells were simultaneously exposed to a matrix of different concentration combinations of CHIR-124 and SN-38 for 48 h, significant synergy or >10% deviation from additivity was observed in the concentration ranges of ≥4.2×108 mol/L for SN-38 and≥ 6.0×108 mol/L for CHIR-124. Compared to IR alone, the number of mitotic cells increased dramatically in p53-/- HCT116 cells after concomitant Chir-124 exposure, while no such effect was observed in p53-sufficient WT HCT116 cells. Chir-124 was able to radiosensitize HCT116 cells that lack checkpoint kinase-2 (CHK2) or that were deficient for the spindle checkpoint protein Mad2. Additionally, Chir-124 could radiosensitize tetraploid cell lines, which were resistant to DNA damaging agents. Radiosensitization mediated by Chir-124 is greatly influenced by the p53 and cell cycle checkpoint system [1, 2].
In vivo, severe combined immunodeficient mice harboring MDA-MD-435 tumor xenografts were randomized into the treatment of 10 mg/kg CHIR-124, 20 mg/kg CHIR-124, 10 mg/kg CHIR-124 with 5 mg/kg CPT-11, or 20 mg/kg CHIR-124 with 5 mg/kg CPT-11. CPT-11 was given i.p. four times daily ×5 on days 1 to 5, while CHIR-124 was given orally four times daily ×6 on days 2 to 7 in captisol. Tumors harvested from mice sacrificed on day 4 of treatment were examined for apoptosis by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling staining and for mitotic index by immunofluorescence labeling with phospho-histone H3 antibody in a similar study [1].
References: [1].Tse AN, Rendahl KG, Sheikh T, et al. CHIR-124, a novel potent inhibitor of Chk1, potentiates the cytotoxicity of topoisomerase I poisons in vitro and in vivo. Clinical Cancer Research, 2007, 13(2): 591-602.[2].Tao YG, Leteur C, Yang CY, et al. Radiosensitization by Chir-124, a selective CHK1 inhibitor Effects of p53 and cell cycle checkpoints. Cell Cycle, 2007, 8(8): 1196-1205.
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如题，实验小白，但是导师给了这个课题，对于这通路不是很了解，园子里也没找到关于非经典通路的，希望各位战友帮忙下，谢谢了
信号通路图：向左转|向右转
相关抑制剂：Selumetinib(AZD6244)是一种有效，高选择性的MEK1抑制剂，IC50为14 nM，也抑制ERK1/2磷酸化，IC50为10 nM，对p38α， MKK6， EGFR， ErbB2， ERK2， B-Raf等没有抑制作用。Phase 3。Vemurafenib(PLX4032, RG7204)是一种新型有效的B-RafV600E抑制剂，IC50为31 nM。SB203580是一种p38 MAPK抑制剂，IC50为0.3-0.5 μM，与SAPK3(106T)和SAPK4(106T)相比选择性低10倍，且抑制PKB磷酸化，IC50为3-5 μM。参考：www.selleck.cn/pharmacological_MAPK.html
我最近跑电泳NF-kB信号通路，跑了p65和IkB-α两个蛋白，p65显影的时候有结果，但是IkB-α显示的时候是没有条带，空白一片，我跑电泳的条件不变、蛋白样品也是相同的，但是一个有结果，一个没有结果，请问原因是什么，请大神帮忙解答一下，谢谢啦~~
→MAPKK→MAPK→进入细胞核→其它激酶或基因调控蛋白（转录因子） 的磷酸化修钸。
信号通路的组成： 配体――生长因子； RTK—酪氨酸；
接头蛋白（生长因子受体接头蛋白-2， GRB-2）； GRF－－鸟苷酸释放因子； Ras—GTP 结合蛋白； Raf――是丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）
蛋白激酶（称 MAPKKK）。
主要功能： 调节细胞的增殖与分化， 促进细胞存活， 以及细胞代谢过程中的调节与校正。
1) JAK与STAT蛋白
JAK-STAT信号通路是近年来发现的一条由细胞因子刺激的信号转导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。与其它信号通路相比，这条信号通路的传递过程相对简单，它主要由三个成分组成，即酪氨酸激酶相关受体、酪氨酸激酶JAK和转录因子STAT。
(1) 酪氨酸激酶相关受体（tyrosine kinase associated receptor）
许多细胞因子和生长因子通过JAK-STAT信号通路来传导信号，这包括白介素2?7（IL-2?7）、GM-CSF（粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子）、GH（生长激素）、EGF（表皮生长因子）、PDGF （血小板衍生因子）以及IFN（干扰素）等等。这些细胞因子和生长因子在细胞膜上有相应的受体。这些受体的共同特点是受体本身不具有激酶活性，但胞内段具有酪氨酸激酶JAK的结合位点。受体与配体结合后，通过与之相结合的JAK的活化，来磷酸化各种靶蛋白的酪氨酸残基以实现信号从胞外到胞内的转递。
(2) 酪氨酸激酶JAK（Janus kinase）
很多酪氨酸激酶都是细胞膜受体，它们统称为酪氨酸激酶受体（receptor
tyrosine kinase, RTK），而JAK却是一类非跨膜型的酪氨酸激酶。JAK是英文Janus kinase的缩写，Janus在罗马神话中是掌管开始和终结的两面神。之所以称为两面神激酶，是因为JAK既能磷酸化与其相结合的细胞因子受体，又能磷酸化多个含特定SH2结构域的信号分子。JAK蛋白家族共包括4个成员：JAK1、JAK2、JAK3以及Tyk2，它们在结构上有7个JAK同源结构域（JAK homology domain, JH），其中JH1结构域为激酶区、JH2结构域是“假”激酶区、JH6和JH7是受体结合区域。
(3) 转录因子STAT（signal transducer and activator of transcription） STAT被称为“信号转导子和转录激活子”。顾名思义，STAT在信号转导和转录激活上发挥了关键性的作用。目前已发现STAT家族的六个成员，即STAT1-STAT6。STAT蛋白在结构上可分为以下几个功能区段：N-端保守序列、DNA结合区、SH3结构域、SH2结构域及C-端的转录激活区。其中，序列上最保守和功能上最重要的区段是SH2结构域，它具有与酪氨酸激酶Src的SH2结构域完全相同的核心序列“GTFLLRFSS”。
2) JAK-STAT信号通路
与其它信号通路相比，JAK-STAT信号通路的传递过程相对简单。信号传递过程如下：细胞因子与相应的受体结合后引起受体分子的二聚化，这使得与受体偶联的JAK激酶相互接近并通过交互的酪氨酸磷酸化作用而活化。JAK激活后催化受体上的酪氨酸残基发生磷酸化修饰，继而这些磷酸化的酪氨酸位点与周围的氨基酸序列形成“停泊位点”（docking site），同时含有SH2结构域的STAT蛋白被招募到这个“停泊位点”。最后，激酶JAK催化结合在受体上的STAT蛋白发生磷酸化修饰，活化的STAT蛋白以二聚体的形式进入细胞核内与靶基因结合，调控基因的转录。值得一提的是，一种JAK激酶可以参与多种细胞因子的信号转导过程，一种细胞因子的信号通路也可以激活多个JAK激酶，但细胞因子对激活的STAT分子却具有一定的选择性。例如IL-4激活STAT6，而IL-12却特异性激活STAT4。
2 p53信号
1) p53基因的发现
p53基因是迄今发现与肿瘤相关性最高的基因。1979年，Lane和Crawford在感染了SV40的小鼠细胞内分离获得一个与SV40大T抗原相互作用的蛋白，因其分子量为53 kDa，故而取名为p53（人的基因称为TP53）[3]。起初，p53被误认为是癌基因，直到上个世纪90年代，人们才认识到引起肿瘤形成或细胞癌变的p53蛋白是p53基因的突变产物。野生型p53基因是一种重要的抑癌基因，它是细胞生长周期中的负调节因子，在细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞分化、凋亡和衰老等许多过程中发挥了重要的生物学功能，因而被誉为“细胞卫士”。随着研究的深入，人、猴、鸡、大鼠、非洲爪蟾和斑马鱼等多种模式动物的p53基因也相继被克隆。
其中，人类TP53基因定位于染色体17P13.1，小鼠p53基因被定位在11号染色体上，并在14号染色体上发现无功能的假基因。在这些进化程度迥异的动物中，它们的p53基因结构却异常保守，基因全长16-20kb，都由11个外显子和10个内含子组成。其中第1个外显子不编码结构域，外显子2、4、5、7、8则分别编码5个进化上高度保守的结构域，转录形成约2.5 kb的mRNA。之后，在基因同源性的基础上又陆续发现了p53家族的其它成员，分别是p73和p63，它们也因各自的分子量而得名，具有和p53相似的结构和功能。
2) p53信号通路
p53基因受多种信号因子的调控。例如：当细胞中的DNA损伤或细胞增殖异常时，p53基因被激活，导致细胞周期停滞并启动DNA修复机制，使损伤的DNA得以修复。然而，当DNA损伤过度而无法被修复时，作为转录因子的p53还可进一步激活下游促凋亡基因的转录，诱导细胞凋亡并杀死有DNA损伤的细胞。不然，这些DNA损伤的细胞就可能逐渐脱离正常的调控，有可能最终形成肿瘤。
虽然正常状态下p53的mRNA水平很高，而且有大量蛋白质合成，但p53蛋白容易降解，所以正常细胞内p53蛋白水平很低。蛋白的泛素化（ubiquitination）修饰是细胞内蛋白代谢过程中的最普通的降解方式，p53蛋白的降解也是通过泛素化来实现的。MDM2是一种特异性针对p53的泛素化E3连接酶，它可直接与p53蛋白结合来促进p53蛋白的泛素化降解，并在细胞内p53蛋白动态平衡中发挥关键的作用。MDM2本身也可被p53蛋白激活，因此MDM2是p53通路中重要的负反馈调节因子（negative feedback regulator）。
我想测药物干预下P65信号通路激活情况，想问下需要像wb一样做一个磷酸化/总蛋白的比值吗，还是分别测出来比较就可以了呢。
全部的：www.cell.com/snapshots
信号通路1.zip(33848.99k)
信号通路2.zip(24706.36k)
