SPA各种免疫检测试剂制备实验——酶标记A蛋白纯品资讯分析测试...
| 实验方法原理 | HRP可以于共价键或非共价键方式黏附在其他的蛋白质分子上，常见的标记方法有戊二醛一步法和二步法，也可以用过碘酸钠氧化法，它们主要为共价键结合方式；另一种为非共价键结合方式，是用4，4"-二氟-3，3"-二硝基苯基砜（4，4"-difluoro-3，3"-dinitrophenylsulfone，FNPS）作为交联试剂。戊二醛二步法的标记效率要高于一步法，过碘酸钠氧化法的标记效率要高于戊二醛二步法。其主要原理是二种蛋白质分子的赖氨酸上的e基团和含氨基的N端经活化剂活化而结合。由于抗体和酶分子上所具有的反应基团很少，需通过功能基团（如戊二醛）将更多的抗体和酶分子结合在一起，酶分子首先和双功能试剂结合，再与抗体分子结合，这样可以结合更多的酶和抗体，而且无聚合物产生。HRP还可以与生物素和亲和素结合。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 纯品SPA 试剂、试剂盒 | HRPNaHCO3二硝基氟苯-无水乙醇NaIO3乙二醇碳酸盐NaBH4PBS甘油 实验步骤 | 1.取HRP5mg，溶于0.1ml新鲜配制的0.3mol/L（pH3.1）NaHCO3中，加0.1ml1％二硝基氟苯-无水乙醇，于室温中避光轻轻搅拌1h。 2.再加入0.08mol/LNaIO31ml，室温中搅拌30min。 3.再加0.08mol/L乙二醇1ml，混匀后轻轻搅拌1h。 4.装入透析袋中，在4℃条件下，用0.01mol/L（pH9.5）碳酸盐缓冲溶液1500ml于2000ml烧杯中透析。 5.称取纯品SPA5mg，加入上述经醛化的HRP中，在25℃下充分混匀，轻轻搅拌5h。 6.加5mgNaBH4，置于4℃3h。 7.结合物用0.02mol/L，（pH7.4）PBS透析（4℃），3～4次，加等量甘油，于-40℃或冻干避光保存。 注意事项 | 展开 其他 | 展开 |
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发布于 ： 2018-08-08
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