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今天文章就简单整理了一下最近遇到的问题，有些问题对你来说可能很简单，但是还是会给一些科研菜鸟带去小麻烦，特整理了这么个专场来涨涨姿势。
这里就简单整理了5个问题，具体内容如下：
小编自己在各大论坛看到最多的三个答案：
1）48T可做42个样本加6个标准曲线；96T可做90个样本加6个标准曲线
2）以96T试剂盒来算，定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品，定性的试剂盒可以做94个左右的样品
3）96T的ELISA试剂盒，去除标准品复孔检测，最多还能检测80个标本；48T的最多30个样本。
2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品？板能重复利用吗？
96T，一般做复孔的话，做标准曲线需要16个孔，剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。
3、想请教一下，我想用elisa法测血清里的一种抗原，查了资料，发现没有现成的试剂盒用，现在就有2种备选方案，一种是买抗体对自己包被（查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗）。哪种比较好呢？自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢？
如果你觉得技术不错有队其他公司不放心，可以自己购买抗体对自己包被，这个就是麻烦点，自己包被用着放心，舒心；
另外国内还是有一些资质不错的公司，如北京达科为，上海巧伊，依科赛，深圳欣博盛等等
4、western和ELISA处理样本有何差别？
WesternBlot样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。
ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。
不过ELISA最好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒最低可测浓度。
5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢？
提出这个问题的朋友其实该打，目前国际上各个品牌的试剂盒生厂商，都会有其偏重点，像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼，而其他牌子也一样的。
Bender：粘附分子方面的试剂盒；
Cayman：花生四烯酸类产品的试剂盒；
Merck(Linco)：内分泌研究方面的试剂盒；
Tips：
1、买Elisa试剂盒时，尽量先查文献，通过文献找品牌，再找供应商，找供应商就找正规代理商，千万不要去干“赔夫人又折兵”的蠢事。
2、ELISA中，复孔就是同一个样品加到至少两个孔中（一般3个或4个），最后取其平均值作为样品的读数，这样测得的结果才有说服力！
做复孔是为了较好的较少组内差异，如果血清不足不做复孔也可以。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：
（1）固相的抗菌素原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原
或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情
况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要
有以下几种类型：2.2.1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
1） 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。
洗涤除去其他未结合物质。
3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合
的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、
AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合
物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动
物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相
载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标
抗体一起保温反应，作一步检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标
抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应
后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的
吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现
象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重
时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常
增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用
高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可
用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型
问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应
性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗
体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含
有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用
F（ab"）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。双抗体
夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小
分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。2.2.2 双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应
的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需
稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采
用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。2.2.3 间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗
体）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法（见图2-3）。操作步骤如下：
1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2）加稀释的受检血清，保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗
体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗涤过程
中被洗去。
3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体，但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗
体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，
固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
4）加底物显色
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包
被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结
果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发
生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过
E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物
质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反
应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。病人血清中受检的
特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体
上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质
（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检
测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。2.2.4 竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特
异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体
量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯
度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被
法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的
杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本
和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本
与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的
抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。2.2.5 竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法
进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相
抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。
小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。2.2.6 捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断(early diagnosis)中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或
IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的
IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人
IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的
干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕
获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后加入
抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作
用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断(early diagnosis)。甲型肝炎病毒
（HAV）抗体的检测模式见图2-7。
类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体，导致假阳性反应。因此中和
IgG的间接法近来颇受青睐，用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。2.2.7 ABS-ELISA法
ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白，分子
量60000，每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物，分子量
244。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分
子形成生物素标记产物，标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性，
其亲和力较抗原抗体反应大得多，两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生
物素分子结合，因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素（LAB）法和桥联亲
和素-生物素（ABC）法两种类型。两者均以生物素标记的抗体（或抗原）代替原ELISA系
统中的酶标抗体（抗原）。在LAB中，固相生物素先与不标记的亲和素反应，然后再加酶
标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期，亲和素从蛋清中提取，这种卵亲和素为碱性
糖蛋白，与聚苯乙烯载体的吸附性很强，用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的
链霉亲和素则无此缺点，在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通
ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
首先要什么有什么的，你得好好考虑一下。
2、看生产地址
根本没有生产地址，我们知道做实验做产品需要很多的仪器、试剂、耗材，没有人相信一间简单的屋子可以生产各种样的试剂盒。
3、看产品包装
没有任何的生产地址、联系方式等信息，这种产品有问题了连个投诉的地方都没有。
4、看公司网站
有些打着国外原装旗号，整个公司网站为英文页面，实际注册IP地址在中国。如果写着国外的地址，让你国外的朋友实地去看一下！
5、做交叉验证
拿对方提供的几个种类的试剂盒，把里面的关键组份相互替换做做实验，如果交叉严重，只能说明是一种原料生产的试剂盒贴了不同的标签。
6、看价格
价格低得离谱，却打着进口大公司原料分装，核算成本，这种低得离谱的价格是连原料都买不起的。
采用抗-HBe抗体包被反应板，加入校准品及被测样本，同时加入定量HBeAg中和抗原，经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe，若标本中抗-HBe浓度高，HBeAg将被大量中和，使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液（β－NTA）将标记在抗体上的Eu3+解离到溶液中，Eu3+和增强液中的有效成分形成高荧光强度的螯合物，荧光强度和样本中的抗-HBe浓度成反比。
