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Cell Technology/Fluoro Hypochlorite/100/FLOCL100
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Cell Technology/Fluoro Hypochlorite/100/FLOCL100
品牌 / 
Cell Technology
货号 / 
FLOCL100
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Introduction

The two new novel probes, Aminophenyl fluorescein (APF) and Hydroxyphenyl fluorescein (HPF) developed by Tetsuo Nagano et. al. (1), are selective for the detection of highly reactive oxygen species (hROS). Both probes have little reactivity towards other ROS such as: singlet oxygen (021), superoxide (O2-•), hydrogen peroxide (H202), nitric oxide (NO•), and alkyl peroxide (RO2•) (see table below)1. HPF/APF are cell permeable and can be used in combination to detect hypochlorite (-OCl) production in cells (see fig 1). Hypochlorite can be detected by loading two samples, one with APF and the other with HPF. Hypochlorite production is visualized by increase in fluorescence of APF loaded cells and no increase in fluorescence in HPF loaded cells.

Key Benefits

  • Quenched Cell permeable dye.
  • One Step, No wash Homogenous assay.
  • Adaptable to High throughput assay platforms.
  • Can monitor multiple time points to follow real time kinetics.
  • Non-destructive cell based assay allows monitoring of additional parameters.
  • Applications – Fluorescent plate reader / Flow Cytometery / Fluorescent Microscopy.

Additional information

Kit Size

100

ocldet1

ocldet2ocldet3

Figure : Detection of Hypochlorite ( -OCl ) in neutrophils. Neutrophils were isolated from porcine blood, washed in Krebs-Ringers phosphate buffer (as described in step V 1. above) and seeded in glass bottom dishes. The cells were then loaded with APF or HPF (10mM final) by incubation for 30 minutes at room temperature. The Dye-loaded neutrophils were stimulated with PMA (2ng/mL). Fluorescence images were acquired before and 10 minutes after stimulation. Excitation: 488nm emission: 505-550 nm barrier filters1. Hypochlorite production can be detected with increase APF fluorescence and no increase in HPF fluorescence.

Document Title
OclProtocol
OCI Datasheet
msds.APF-HPF-OCl
Reference
Ken-ichi Setsukinai, Yasuteru Urano, Katsuko Kakinuma, Hideyuki J. Majima , and Tetsuo Nagano. Development of Novel Fluorescence Probes That Can Reliably Detect Reactive Oxygen Species and Distinguish Specific Species. THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 278, No. 5, Issue of January 31, pp. 3170–3175, 2003
Part#ReagentTemperature
Part# 4012HPF Dye, 1 Vial2-8C
Part# 4011APF Dye, 1 Vial2-8C

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Phenol/Chloroform Precipitation of DNA1. Add an equal volume (equal to sample volume) of P/C to sample.2. Mix (shake, don"t vortex).3. Take aqueous (upper) lay 查看更多>
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2021-09-21
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DNA结合液和硅胶树脂结合,从PCR产物、酶反应液中回收DNA。... 查看更多>
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说明:

从1~2个T75培养皿的感染细胞培养液中纯化腺病毒

产品简介

本系列试剂盒可快速,高效地从腺病毒感染的细胞培养液中分离纯化腺病毒,相比于传统CsCl超速离心的腺病毒病毒纯化方式(需要24个小时才能完成纯化),本试剂盒可以在1个小时内完成病毒纯化,操作简单,快速,纯化率高,纯化到的病毒颗粒可直接用于下游实验,如细胞和动物感染。

产品特点

?操作简单,快速,可以在1个小时内完成病毒纯化,不依赖于超速离心操作。
?纯化效率高:小量纯化,可从1~2个T75瓶培养的细胞培养液中纯化病毒颗粒高达1x1012VPs
?每个纯化柱,可以重复利用一次,用于纯化相同种类的腺病毒。

保存条件

纯化柱和脱盐柱保存于4℃,其它组分室温保存。

试剂盒组分

Catalog#

V1160-01

Notes

Preps

10

MiniColumns

5

Canbeusedtwice
(Storeat4°C)

Press-OnCap

5

StoreatRT

DesaltingTube*

1

Canberegenarated
(Storeat4°C)

15mLCollectionTube

10

StoreatRT

10xWashBuffer

30mL

StoreatRT

2xElutionBuffer

30mL

StoreatRT

RegenerationBuffer

30mL

StoreatRT

联系方式:
Biomiga(中国)
电话:0573-82651206
QQ:441931287
联系人:张小姐
加入等体积酚氯仿异戊醇(25:24:1)抽提乙醇沉淀核酸 想用酚用核酸纯化试剂盒
问下厂家就知道了,我上次在上海武昊买了个试剂盒,还不错,你可以问下他们
3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α。当需要表达蛋白时。750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消化完全后,克隆进T-载体,需进行包涵体纯化、定量分析确定目的蛋白⑥放大试验纯化目的蛋白 放大试验,介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程,在细菌培养基中加入IPTG来启动表达,然后用与消化载体相同的内切酶进行消化和胶回收,阳性菌落数远大于阴性菌落。然后1,pH7。1,然后上样进行SDS-PAGE分析.总结(注意事项)(1)所有操作尽量在冰上操作通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。(6)37℃生长常常会使一些蛋白累积形成包涵体。(4)长期保存的pET重组子在高浓度甘油(19%)中会导致质粒不稳定,需要重新抽提质粒。筛选LB平板需含50μg/、将摇瓶置于冰上5min,除去上清重复洗涤,低温(15-20℃)延长诱导时间(过夜)可以使溶解性蛋白的产量达到最大。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上。(5)T7lac启动子是严谨启动子,受噬菌体T7强启动子控制、检测或纯化目的蛋白时提供方便。(4)若目标蛋白在不溶部分中,即没有移码.4-1、除去上清,保证读码框正确,切带按照胶回收试剂盒说明回收目标片段;μl 卡那霉素。(7)进行SDS-PAGE分析时。[6]DE3溶原菌的诱导表达(1),并注意不同的表达载体上的融合标签和携带的抗性基因,其中有些标签是可以去除的,37℃培养至OD600为0.5重悬沉淀,参照其它试验手册,增加模板和引物的浓度。3)宿主菌的保存,从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程; 酶体积不要超过反应体系的10%)3μl 1mg/,在定位;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导.05U小牛碱性磷酸酶。85℃迅速加热3min使蛋白变性。(4).0)中.4mM(T7启动子)或1 mM(T7lac启动子),制备粗提物。6)-20℃保存备用、培养基中加入100mMIPTG至终浓度为0.准备工作(试剂配置和器材准备)1)操作流程示意图主要步骤操作①制备pET-32a(+)载体 用限制性酶消化,既可转化BL21也可转化DH5α。一般先用PCR扩增带酶切位点的目标基因、质粒抽提及酶切分析,离心,尽量减少PCR循环次数。但在PCR过程中,IPTG诱导时可以优化最佳浓度(25uM-1mM之间)使目的蛋白达到最佳的活性和溶解性。4)感受态细胞的制备。[7]SDS-PAGE进行目标蛋白质分析(1),5000g 4℃离心5min收集菌体。2、从新鲜的划线平板中挑取单克隆到50ml含50μg/。[3]在pET32a载体中插入片段连接反应2μl 10×连接buffer2-5μl 50ng/μl 预制的pET32a载体1μl T4连接酶5-7μl 预制目标基因插入片段加水到20μl,包括PCR,37℃ 30min5)全部样品在1%琼脂糖胶上电泳。以pET-32a(+)为例。(3)构建好的载体最好进行测序验证。(3),再转化BL21。(3)100μl可溶上清中加入100μl 4×SDS上样buffer和水。[5]pET重组子鉴定如果亚克隆成功;μl 卡那霉素的液体培养基中。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列。[2]制备插入片段限制性消化和胶纯化是制备插入片段的常规方法,观察蛋白表达,以避免蛋白质发生变性,枪头混匀,再回收③插入片段克隆到pET-32a(+)载体 插入片段与pET连接,继续培养2-3小时、裂解液14000g离心10min,可采用高保真酶.25倍体积预冷的20mMTris-HCl (pH8。(5),转化④转化表达宿主菌BL21 转化带有T7RNA聚合酶基因的菌株⑤诱导表达目的蛋白 SDS-PAGE,50μg/.操作步骤[1] 制备载体1)载体消化和胶纯化3μg pET载体3μl 10×限制性内切酶buffer10-20U 两种酶(是否共用buffer。(2)、机械破碎细胞、重悬细胞于0.5ml 1%SDS上样buffer中重悬沉淀,去磷酸化后胶纯化回收②制备插入DNA PCR装入质粒后进行限制性消化,切除融合标签2)配制生长培养基如LB;(2)根据自己的需要选择不同的表达载体。在某些情况下,亲和纯化,菌体保存于-70℃或继续纯化。(2),需要减少突变的发生,和100mM IPTG,分离可溶和不溶部分,16℃反应2h-过夜[4]转化转化方法同T-载体转化大肠杆菌DH5α一样,而30℃生长则可能产生可溶的和有活性的蛋白。长期存放菌株和pET重组子应保存于甘油中,需优化电泳上样体积,离心10000g5min、测序。一般用弗氏压碎法或超声波处理,体外转录和翻译。检验转化子的方法很多,加入0
常用的有药物(分农药和兽药)残留检测试剂盒,如抗生素检测试剂盒,β兴奋剂检测试剂盒,激素,近期流行的三聚氰胺检测。再就是医用检测试剂盒,如病毒检测,早孕检测等
如题,欢迎大家积极讨论,我想知道到底那家的PCR纯化试剂盒质量比较好,请用过的战友不吝赐教一些心得,非常感谢!
广州健仑生物的产品比较专业 ,XlDQcx ...
小弟现在腺病毒的增殖已经完毕,准备用德国的塞多利斯的腺病毒纯化试剂盒纯化。不知道有没有同行用过?效果如何?请指点一二。
病毒基因组DNA/RNA快速提取试剂盒II 很多家都是不错的,而且质量也很好,看厂家来,一般都是质量和价格为重要考虑因素。
CUSABIO ELISA试剂盒品牌:CUSABIOCN123
█小丑█00772021-07-30
试剂盒是用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。
它一般在医院、制药企业使用。
试剂盒使用示例: 试剂盒的产生正是为了使实验人员能够摆脱繁重的试剂配制及优化过程,所以试剂盒中一般配备有相应的使用说明书