【求助】夹心法ELISA标准曲线是否应该与试剂盒里提供的一致？

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2021-08-15

问题描述：

我做的是血清中IKZF3测定，由于没有现成的试剂盒，自己从国内的CUSBIO定制的，分批订货。。前两次的标准曲线形状和公司提供的基本近似。但这一次却差太远。我做出来的近似线性，而公司提供的还是和原来的......

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66180

用户

1。我做出这样的标准曲线，原因是什么？答：此问题无法回答。2。标准曲线是否应该以公司提供的为准？如果与公司提供的不一致，是否说明我的实验操作有问题？答：标准曲线不能以公司提供的为准。实际标准曲线与公司提供的不一致是普遍存在的；而实际标准曲线与公司提供的完全一致基本上为巧合。标准曲线的不同不能说明你的实验操作有问题。但是，你的实验操作要是与公司的实验操作不一样，得到的实际标准曲线与公司的标准曲线应该是不一样的。3。我做的标准品检测，最大浓度的OD值与公司提供的标曲差距为何那么大，是显色时间不同吗？我控制的显色时间为15分钟，而说明书要求是10-30分钟。答：夹心法ELISA反应实际上是两种方法。其一，就是常用的夹心法ELISA反应，这是一个双抗夹心反应，由于多加了一层抗体，提高了特异性检测的灵敏度；其二，是改良双抗夹心法，是在双抗夹心反应的基础上中间又多加了酶标抗抗体，使其灵敏度和重复性均比双抗夹心ELISA好。定量检测最讲求实验体系的完整性。这种完整性不仅仅体现在试剂的稳定性上，还贯穿于整个实验过程中使用的各种仪器和工具甚至流程与人。由于您使用的仪器与公司使用的仪器并非同一台，操作过程中加样量的精准性、孵育时间、避光过程的拿捏、洗涤手法、显色时间以及终止液加入时机也与公司不同，因此，您所测量得的OD值必定不与公司测量的OD值完全相同，因而，未经核实就直接采用公司的标准曲线是不妥当的。由于各种因素的影响具有多种不确定性，建议夹心法ELISA定量检测每批均应做标准曲线及质控，其质控点最好能包含空白值、临床异常低值、诊断阈值、临床正常参考中值和临床异常高值5个点；最低质控点要求最少应包含空白值和诊断阈值。显然，这样的做法耗时、耗财，还望memesasa再三斟酌。最后我送您一句话--------“科研和临床应用的不同点在于：科研可以9999次失败只要1次成功；临床应用只能9999次重复成功只有1次随机失误。”共勉吧！

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memesasa

用户

展开引用66180标准曲线不能以公司提供的为准。。。定量检测最讲求实验体系的完整性。。。建议夹心法ELISA定量检测每批均应做标准曲线及质控，其质控点最好能包含空白值、临床异常低值、诊断阈值、临床正常参考中值和临床异常高值5个点；最低质控点要求最少应包含空白值和诊断阈值。。。“科研和临床应用的不同点在于：科研可以9999次失败只要1次成功；临床应用只能9999次重复成功只有1次随机失误。”......十分感谢您的热心回答。我清楚了

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jingqiu1989

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我最近做的标准曲线跟你的很像。用的是tablecurve，但是过期了，你是用什么做的？能给我传一份吗？非常感谢！！

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