PlasmidInfo:
PlasmidInformation
ProductName:pSF-pA-CMVe-FLuc
ProductCode:OG252
Size(bp):5973bp
BacterialAntibioticSelection:KanR
OriginandCompatibility:pUChighcopyderivedfrompBR322
BacterialCopyNumber:500-700percell
Promoter:
PlasmidPurpose:
Thisplasmidcontainsthemajorimmediateearlycytomegalovirus(CMV)enhancerregionupstreamofthePhotinuspyralis(FLuc)luciferasereporter.Theenhancercanbeusedtoincreasethestrengthofweakerpromoterswhilstoftenretaininganyregulationthattheyalreadyhavesuchastissuespecificityortranscriptionfactoractivationinresponsetostimulus.Thisenhancersequencehasbeeninsertedupstreamofasyntheticpoly-adenylationsignalthatreducesnon-specifictranscriptionofanygenethatisinsertedintothemultiplecloningsite.
SequenceandMap:
OtherInfo:
TranscriptionTermination:Thisplasmidcontainsthreealternativetranscriptionterminatorsformammalianbacterialandbacteriophage(T7)expression.Thismeansthatonlythepromoterneedstobechangedtoaltertheexpressionsystemyouareusing.Wesellmultiplepromotersthatcanbeusedineachofthesesystems.Thepresenceofeachterminatordoesnotreduceexpressioninthealternativesystems.
Cloning:
Cloninginagene:Thisplasmidcontainsagenewithinthemainmultiplecloningsite(NotI-ClaI).Anyplasmidthatwesellwherethegeneisthisconfigurationwillbelocatedintheexactsamepositioninrelationtothestartandstopcodonofthegene.TheonlyexceptionstothisrulearefusionsproteinswherethefusiongenemaybepositionedatthefrontorendoftheMCStoallowgenefusion.
Bypositioningallofourgenesinthesamelocationitallowsthemtobetransferredbetweenplasmidsusingthesamecloningmethodandrestrictionsitesregardlessoftheplasmidbeingusedfromourproductrange.InsertinganewgeneintothisplasmidshouldbeeasilypossIBLeusingarangeofstandardrestrictionenzymesitesthatflankthegenecurrentlyinthevector.
Multiplecloningsitenotes:InthemultiplecloningsitetherearetwoimportantrestrictionsitescalledBsgIandBseRIsites.ThesesitesbothcuttheDNAatthesamepositionandcleavethestopcodonofthegeneinthemultiplecloningsiteinthisplasmidtherebyproducingaTAoverhang.Thisoverhangiscompatiblewithanyofourpeptideorreporterfusiontagplasmidsalsocutwitheitheroftheseenzymes.ThisallowsseamlessC-terminalfusionstobemadewiththegeneinthismultiplecloningsiteusingasinglecloningstepfromourC-terminalpeptideandreportertagproductrange.NormallytheeasiestmethodistoclonetheC-terminaltagfromourotherplasmidproductsintothisplasmidusingBsgIorBseRIandthedownstreamClaIrestrictionsite.
BseRIandBsgIsitesarenon-palindromicandcleaveadefinednumberofbasesawayfromtheirbindingsites.Thisallowsthemtocuttheupstreamstopcodoninthegeneinthisplasmidregardlessofthegenesequence.
IPStatus:
IntellectualPropertyStatusThisproductispartofourSnapFastplasmidrange,formoreinformationontheIntellectualpropertystatusofthisplasmidpleaseclickhere
ebiomall.com
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在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。向左转|向右转
ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。
生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html
如果用双抗体夹心法，第二个抗体可以用多抗，这样保证你的抗原会被结合，多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
1、重复性不好；
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；
3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。1、直接法（direct ELISA）将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。2.间接法（indirect ELISA）此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。缺陷：交互反响发作的机率较高。3.双抗体夹心法（sandwich ELISA）被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。4.竞争法（competitive ELISA）样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。
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