
CA-gp120A | |
Name | EliteTMgp120(HIV-1/CladeA)ELISAKit |
Description | Elite™gp120(HIV-1/CladeA)ELISAKitisastreptavidin/biotin-basedsandwichELISA. |
Application | Theassayisdesignedforthequantitativeanalysisofgp120(HIV-1/CladeA)concentrationincellculturesupernantantsorseruminadetectionrangeof1-1000ng/ml. |
Detection | Microplatereader(450nm) |
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eEnzyme是一家美国高质量生物学试剂及检测试剂盒品牌供应商,其与美国国立卫生研究院合作紧密,在全球范围内为广大科研客户提供高品质的产品与技术服务,其主要生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原,细胞因子蛋白,pcr产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂,产品应用于生物技术研究,制药,药物发现,癌症研究,传染性疾病,微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域
eENZYME为科学界生产和销售高质量的生物试剂盒和生物分析试剂盒。与NIH密切合作以保证产品在生命科学研究的多个领域成功地使用。努力提供新颖价廉且有效的工具,使实验更容易成功。产品在科研、生物技术、制药和政府的研究实验室中得到广泛的应用,包括药物发现、癌症研究、传染病研究、微生物学和分子诊断。
【简单介绍】eENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原,细胞因子蛋白,PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂,产品应用于生物技术研究,制药,药物发现,癌症研究,传染性疾病,微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。【详细说明】欢迎eENZYMEeENZYME生产销售高质量的抗体和用于传染病研究的抗体/抗原,细胞因子蛋白,PCR产品等用于分子和细胞生物学研究的生物试剂,产品应用于生物技术研究,制药,药物发现,癌症研究,传染性疾病,微生物和分子诊断等众多生命科学技术领域。 Ë ENZYMEis的高品质生物试剂及实验室设备科学界一个制造商和分销商。我们密切合作,与美国国立卫生研究院的社区,以保证我们的产品生命科学研究在广泛领域的成功表现。我们致力于提供创新和具有成本效益的工具,使您更容易取得成功。我们的产品用于在学术,生物技术,制药和政府研究实验室,包括药物发现,癌症研究,传染病研究,微生物学和分子诊断许多不同的应用。公司网站:www.eenzyme.com 目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA(A/California/06/09)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1(H1N1/Pan)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1(A/新喀里多尼亚)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP(A/新Caledonia/20/1999)(甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型(H1N1/A/新喀里多尼亚(H1N1))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3(H3N2)(A/WIS/2005)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5(A/香港Kong/483/97)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1(H5N1)(A/Vietnam/1203/2004)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1(H5N1,禽流感)(A/斑头雁/Qinghai/12/05)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1,人)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1(A/Chicken/NY/29878/91)(H2N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1(A/chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA(A/Chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1(A/duck/Hainan/6/2004)(H6N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1(A/鸡/荷兰/2/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA(A/Chicken/Netherlands/1/03)(H7N7)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11(A/duck/Yangzhou/906/02)(H11N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感(NP)的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感(医管局)多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12(A/pintail/Alaska/102/05)(H12N5)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4(A/environment/Maryland/1101/06)(H4N6)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15(A/Australia/83/00(H15N8))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16(A/Sweden/99(H16N3))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA(A/California/06/09)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1(H1N1/Pan)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1(A/新喀里多尼亚)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP(A/新Caledonia/20/1999)(甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型(H1N1/A/新喀里多尼亚(H1N1))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3(H3N2)(A/WIS/2005)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5(A/香港Kong/483/97)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1(H5N1)(A/Vietnam/1203/2004)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1(H5N1,禽流感)(A/斑头雁/Qinghai/12/05)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1,人)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1(A/Chicken/NY/29878/91)(H2N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1(A/chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA(A/Chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1(A/duck/Hainan/6/2004)(H6N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1(A/鸡/荷兰/2/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA(A/Chicken/Netherlands/1/03)(H7N7)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11(A/duck/Yangzhou/906/02)(H11N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0031抗B型流感(NP)的多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0032抗B型流感(医管局)多克隆兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-013-0100抗-H12(A/pintail/Alaska/102/05)(H12N5)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-014-0100抗-H4(A/environment/Maryland/1101/06)(H4N6)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-018抗-H15(A/Australia/83/00(H15N8))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-019抗-H16(A/Sweden/99(H16N3))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYME目录号描述产品类型应用单位供应商IA-01SW-0100抗HA(A/California/06/09)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-011-0100抗H1(H1N1/Pan)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-001-0100抗HA1(A/新喀里多尼亚)(甲型H1N1流感)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-023-0100抗-NP(A/新Caledonia/20/1999)(甲型H1N1流感兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-022-0100抗M2型(H1N1/A/新喀里多尼亚(H1N1))兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004A-0100抗-H3(H3N2)(A/WIS/2005)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗-M1(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-004-0100抗HA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-020-0100抗-NA(H3N2)[A/Wyoming/3/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005H-0100抗H5(A/香港Kong/483/97)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-005-0100抗HA1(H5N1)(A/Vietnam/1203/2004)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-006-0100抗HA1(H5N1,禽流感)(A/斑头雁/Qinghai/12/05)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-010-0100抗-HA2(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-012-0100抗-M1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-021-0100抗-NA(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1,人)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-025-0100抗NS1(A/Vietnam/1203/2004)(H5N1)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-003-0100抗HA1(A/Chicken/NY/29878/91)(H2N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-009-0100抗HA1(A/chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-027-0100抗-NA(A/Chicken/HongKong/NT366/03)(H9N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-007-0100抗HA1(A/duck/Hainan/6/2004)(H6N2)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-008-0100抗HA1(A/鸡/荷兰/2/03)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-028-0100抗-NA(A/Chicken/Netherlands/1/03)(H7N7)兔多克隆抗体WB等100微克eENZYMEIA-0015-0100抗-H11(A/duck/Yangzhou/906/02)(H11N2)兔多克隆抗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1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟,洗涤;
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
如果用双抗体夹心法,第二个抗体可以用多抗,这样保证你的抗原会被结合,多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。
1、重复性不好;
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰,易出现假阳性;
3、不论仪器和手工操作,干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。1、直接法(direct ELISA)将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。优势:操作手续简略,因无须运用二抗可防止交互反响。缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对进步。2.间接法(indirect ELISA)此测定办法与直接法相似,不一样在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。缺陷:交互反响发作的机率较高。3.双抗体夹心法(sandwich ELISA)被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择,才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。4.竞争法(competitive ELISA)样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够联系越多的抗体,而固定抗原就只能联系到较少的抗体,反之亦然。经清洁过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟,依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。优势:可适用比拟不纯的样本,并且数据再现性很高。缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质.
2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质.
3) 加酶标抗体,保温反应.固相
免疫
复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.
4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测.
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题.
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2).
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心.
2.2 双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法.
竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合.标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应.如抗原为高纯度的,可直接包被固相.如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原.洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应.竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法.另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应.抗HBe的检测一般采用此法.
2.5 竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅.小分子激素,药物等ELISA测定多用此法.
2、封闭液肯定不好
3、显色时用封口膜盖好

