【求助】竞争法做ELISA时，加入血清孵育后，抗体就不再结合到微孔板上了

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2010-11-11

问题描述：

RT。本人在做一个竞争法测定某单表位抗原的ELISAkit开发项目。

抗体没有问题，包被在微孔板上的抗原也没有问题，且用纯度较高的抗体与梯度稀释的高纯度的抗原在37℃孵育竞争时，抗体能结合到微孔板上，显色后能得到非常好的标准曲线。

但是一旦用该抗体来检测血清中的该抗原时，抗体就不再和包被的微孔板上的抗原结合，无显色。血清中的成分非常复杂，但是不至于完全阻碍了抗原和抗体的结合啊？百思不得其解，希望版上的有经验者能不吝赐教。

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kern6549

用户

抗原与抗体反应并不是一对一的，同一个抗原可以与不同的抗体发生反应，从而特异性的结合。因为抗原是比较大的，它上面有很多个不同的表位，每一个表位都可以对应一个抗体。你用抗原包被本身就是不对的，血清中针对该抗原的抗体可能有很多种，你检测的只是其中一种，当加入血清后，血清中你的抗体可能并不是占多数的，所以被竞争性的抑制掉了。

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daydezzz

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可能性1：血清中抗原含量较高，将抗体全部竞争掉。可能性2：血清中含有某些杂质，影响酶标反应。

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fable123

用户

展开引用kern6549抗原与抗体反应并不是一对一的，同一个抗原可以与不同的抗体发生反应，从而特异性的结合。因为抗原是比较大的，它上面有很多个不同的表位，每一个表位都可以对应一个抗体。你用抗原包被本身就是不对的，血清中针对该抗原的抗体可能有很多种，你检测的只是其中一种，当加入血清后，血清中你的抗体可能并不是占多数的，所以被竞争性的抑制掉了。......兄，谢谢你的回复。关于血清中的成分竞争性的抑制掉我目的抗体和目的抗原我很赞同。我就是在怀疑到底是血清中什么成分具有这样的抑制效果，让抗原抗体不能结合。对了，可能您没有仔细看我说的第一句话，我的这个抗原是单表位的，抗体也特异只针对该表位，理论上讲特异性是很强的。不知道是不是血清中的其他一些可能影响我的抗原抗体结合的因素存在，我在想，如果我找到这种影响的因子，想办法把该因子在检测前从血清中剔除掉，这样就可以用于检测了。

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