ELISA 2.0 kit for measuring Arachis hypogaea allergen, Ara h 2. | |||||||
| Antibodies: | 1C4/pAb | ||||||
| Standard Range: | 250-0.5 ng/mL | ||||||
| Limit of Detection: | 2.0ng/mL | ||||||
| Background: | OD<0.1 at 450nm | ||||||
| Coefficient of Determination: | R-squared>0.98 | ||||||
| Contents: | Plate: Pre-coated with anti-Ara h 2 monoclonal antibody 1C4Vial 1: (white top) Ara h 2 allergen standardConcentration: 2,500 ng/mlVial 2: (brown) Rabbit anti Ara h 2 antibodyVial 3: (blue top) Peroxidase-conjugated Goat Anti-RabbitBottle 1: Wash buffer, (10x concentrate)Bottle 2: Assay buffer, (10x concentrate)Bottle 3: TMB developing substrateBottle 4: Stop solution (0.5N sulfuric acid) | ||||||
| Storage: | The ELISA 2.0 kit should be stored at 2-8°C. | ||||||
| Expiry: | 6 months from date of receipt | ||||||
| Not Provided: | Type I ultrapure water or 18.2MΩ de-ionized waterVolumetric measuring equipment (e.g. serological pipette, graduated cylinder)Clean containers for buffer and reagent preparationCalibrated single and multi-channel micropipettes and tipsVortex mixerPlate reader capable of reading absorbance at 450nmAnalysis software (recommended, but not required) | ||||||
| Notes: | The allergen standard is recommended for immunoassay calibrationpurposes only.A list of frequently asked questions and troubleshooting guide can be found under the ‘Support’ tab on our website. | ||||||
| Product Resources: | EPC-AH2-1 Certificate of Analysis | ||||||
For research and commercial use in vitro:not for human in vivo or therapeutic use. | |||||||
| Certificate of Analysis | |||||||
| Pre-coated Plate: | 96-well polystyrene microtiter plate coated withmonoclonal antibody 1C4 and treated with stabilizingagent. Sealed in foil pouch with desiccant. | ||||||
| Monoclonal Antibody: | 1C4 | ||||||
| Immunogen: | Ara h 2 | ||||||
| Isotype: | Mouse IgG1 | ||||||
| Specificity: | Binds to a species specific epitope present on Arachis hypogaea allergen, Ara h 2. | ||||||
| Purification: | Produced in ascites and purified by affinity chromatography using Protein G. Single heavy and light chain bands on SDS-PAGE. | ||||||
| Certificate of Analysis | |||||||
| Detection Antibody: | Rabbit polyclonal antiserum | ||||||
| Immunogen: | Polyclonal rabbit antiserum raised against natural purified Ara h 2 | ||||||
| Isotype | Multiple | ||||||
| Specificity: | The antiserum contains IgG antibodies to peanut Arachis hypogaea allergen, Ara h 2. | ||||||
| Activity: | Titrated for use in ELISA at 1/1000 dilution. Prepared in 1% BSA/50% glycerol/PBS, pH 7.4, 0.22 μm filtered, preservative free. | ||||||
| Certificate of Analysis | |||||||
| Allergen Standard: | Purified natural Ara h 2 prepared in 1% BSA/50%glycerol/PBS, pH 7.4. | ||||||
| Concentration/Calibration: | 2,500 ng/mL (based on amino acid analysis) | ||||||
| References: | |||||||
| 1. Perry TT, Conover-Walker MK, Pomés A, Chapman MD, Wood RA. Distribution of peanut allergen in the environment. J Allergy Clin Immunol. 2004 May;113(5):973-6. | |||||||
| 2. Maloney JM, Chapman MD, Sicherer SH. Peanut allergen exposure through saliva: assessment and interventions to reduce exposure. J Allergy Clin Immunol. 2006 Sep;118(3):719-24. | |||||||
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今天文章就简单整理了一下最近遇到的问题，有些问题对你来说可能很简单，但是还是会给一些科研菜鸟带去小麻烦，特整理了这么个专场来涨涨姿势。
这里就简单整理了5个问题，具体内容如下：
小编自己在各大论坛看到最多的三个答案：
1）48T可做42个样本加6个标准曲线；96T可做90个样本加6个标准曲线
2）以96T试剂盒来算，定量的试剂盒一般可以做90个左右的样品，定性的试剂盒可以做94个左右的样品
3）96T的ELISA试剂盒，去除标准品复孔检测，最多还能检测80个标本；48T的最多30个样本。
2、elisa试剂盒96T的能做检测多少血清样品？板能重复利用吗？
96T，一般做复孔的话，做标准曲线需要16个孔，剩下80个孔就可以做40个样本。这个板不能重复利用。而且配套的试剂也只是够一块板子用的。
3、想请教一下，我想用elisa法测血清里的一种抗原，查了资料，发现没有现成的试剂盒用，现在就有2种备选方案，一种是买抗体对自己包被（查了R&D等大公司都没有可用于elisa的单抗）。哪种比较好呢？自己包被的会不会比国产的试剂盒可靠呢？
如果你觉得技术不错有队其他公司不放心，可以自己购买抗体对自己包被，这个就是麻烦点，自己包被用着放心，舒心；
另外国内还是有一些资质不错的公司，如北京达科为，上海巧伊，依科赛，深圳欣博盛等等
4、western和ELISA处理样本有何差别？
WesternBlot样品制备要加蛋白裂解液（含有蛋白酶抑制剂），然后冰上研磨，收集于EP管，冰上裂解30min，4度12000rpm离心15min，取上清分装，即得到蛋白样品。建议直接电泳，多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量，一次性用完一支，避免反复冻融。
ELISA样品，直接脑组织冰上匀浆，收集于EP管，同上一样离心，大约220-250ul每支分装（因为ELISA上样量基本都是每孔100ul，做复孔，每个样品2孔，就需要200ul，为了避免不够2孔，分装时要大于200ul每支），直接实验。多余的-80保存，一样避免反复冻融。
不过ELISA最好少量样品进行预实验，或者查阅文献，看看大概组织里有多高浓度，选择合适的试剂盒，测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准，或者浓度过低，小于试剂盒最低可测浓度。
5、Elisa试剂盒该买哪家公司的呢？
提出这个问题的朋友其实该打，目前国际上各个品牌的试剂盒生厂商，都会有其偏重点，像R&D在细胞因子方面的试剂盒就非常牛逼，而其他牌子也一样的。
Bender：粘附分子方面的试剂盒；
Cayman：花生四烯酸类产品的试剂盒；
Merck(Linco)：内分泌研究方面的试剂盒；
Tips：
1、买Elisa试剂盒时，尽量先查文献，通过文献找品牌，再找供应商，找供应商就找正规代理商，千万不要去干“赔夫人又折兵”的蠢事。
2、ELISA中，复孔就是同一个样品加到至少两个孔中（一般3个或4个），最后取其平均值作为样品的读数，这样测得的结果才有说服力！
做复孔是为了较好的较少组内差异，如果血清不足不做复孔也可以。
第二步、明确编码该蛋白的基因与其它哪些物种同源性最好
第三步、寻找检测这些物种蛋白的试剂盒
第四步、咨询商家ELISA是试剂盒使用的抗体类型:多抗还是单抗? 单抗是针对什么抗原决定簇的?
第五步、 做出自己的判断该买哪个试剂盒，或者实在没有可以找公司进行订制实验
1、采用何种原料和抗体,是否高效、灵敏、特异
2、规范包被操作,吸附是否均匀
3、重复性、可靠性
6、是否提供技术服务
7、适用于血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
8、可检测动物类型是否丰富
9、可检测指标是否齐全
