Cell line Information:
Designations: 3T3-L1Depositors: Massachusetts Institute of TechnologyGrowth Properties: adherentOrganism: Mus musculusMorphology: fibroblastSource: embryoCell Type: fibroblastCellular Products: triglyceridesApplications: transfection hostReceptors: insulin, expressedAge: embryoL1 is a continuous substrain of 3T3 (Swiss albino) developed through clonal isolation. The cells undergo a pre-adipose to adipose like conversion as they progress from a rapidly dividing to a confluent and contact inhibited state. A high serum content in the medium enhances fat accumulation [PubMed ID: 4426090].
The Transfection Reagent:
3T3-L1 Cell Avalanche™ Transfection Reagent is a new class of unique chemical formulations specifically formulated and optimized for transfecting 3T3-L1 Cells. The proprietary formulation of lipids and polymers ensures the highest possible transfection efficiencies and viabilities for 3T3-L1 Cells. For details of the developing process of this reagent, please go to: How did EZ Biosystems develop Avalanche™ Cell type/cell line specific transfection reagent series?
Features:
- Specifically optimized to deliver nucleic acids into 3T3-L1 Cells
- Highest efficiency to ensure experimental success
- Lowest Cellular Toxicity-maintain cell density and reduce experimental biases
- 0.5 ml is able to transfect about 1000 wells of 24-well plate
- Deliver single or multiple plasmids
- Simplest and straightforward protocols
- Suitable for Reverse Transfection
- Compatible with transfection in any plate formats
- Reproducible: due to highly controlled chemical synthesis of each of the ingredients, the reagent forms uniformly sized complex particles with nucleic acids. With optimized protocol, our reagent will ensure the reproducible highest transfection results.
- Developed and manufactured by EZ Biosystems
EZBiosystems美国EZBiosystems™公司是一家全球性转染试剂和基因表达生产服务提供商，公司的研发宗旨是让生命科学研究变得更简单，快速，容易！该公司主要产品之一为新一代转染试剂Avalanche 系列产品，该产品集合了组合化学，分子生物学和细胞生物学技术。公司致力于开发针对不同细胞类型的专用转染试剂。公司研发团队由多个学科经验丰富的专家组成，包括组合化学、脂类化学、生物物理学、分子生物学和细胞生物学。目前,EZBiosystems™主要提供广谱性基因及siRNA体外转染试剂、体内转染试剂、生物治疗性蛋白表达专用转染试剂以及150余种细胞特异性转染试剂。
EZBiosystems特约代理EZBiosystems品牌名称：EZBiosystemsEZBiosystems品牌logo：EZBiosystems品牌官网：http://ezbiosystems.com/EZBiosystems品牌链接：http://www.annoron.com/brand-342.htmlEZBiosystems品牌介绍：EZ生物系统™是一家全球性的基因转染和基因表达产品和服务提供商。EZBiosystems™isaworldwideprovideroftransfectionandgeneexpressionproducts&services.OneofthemajorfocusesofEZBiosystems™hasbeentheresearch,development,andmanufactureofnext-generationtransfectionreagents----theAvalanche®TransfectionReagentseriesbyapplyingourexpertiseincombinatorialchemistry,molecularBIOLOGy,andcellbiology. EZBiosystems品牌相关产品：品牌货号名称规格EZ BiosystemsEZT-CRPR-1Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent0.5ml 1.5mlEZ BiosystemsEZT-OMNI-1Avalanche®-Omni Transfection Reagent0.75ml 1.5ml5*1.5mlEZ BiosystemsEZT-EVDY-1Avalanche®-Everyday Transfection Reagent0.75ml 1.5ml
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需要的仪器有：酶标仪、恒温箱、枪、枪头、烧杯、滤纸.当然有自动洗板机最好.
现在国内最差也是用3代试剂，有些地方会用4代试剂。
4代试剂（检查抗原+抗体）——窗口期为4周。因为抗原于3-4周达到复制的峰值，此时通过4代试剂检查，如果感染了HIV，抗原/抗体至少有一个为阳性，如果都是阴就排除了。
3代试剂（只查抗体）——窗口期为6周。
以上为理论分析+临床经验的结果，可以说是99.9%的准确度。
但是目前FDA、CDC和试剂生产商统一达成的共识，也就是针对普通人，最保守的窗口期是3个月。无论什么试剂，3个月都100%排除。
1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。
2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。
3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。
4．分别于样品孔中加入10UL抗体。
5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。
6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。
8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。
9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。
10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。
11．保存结果，收拾桌面。
12．分析处理数据
注意事项
1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。
2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。
4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。
6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。
DAS-ELISA试剂盒中抗体有包被抗体和酶标抗体，这两种抗体是一种抗体，前者没有酶标，后者用酶进行了标记。
NCM-ELISA一般有一抗和二抗，这两种抗体不一样，前者（一抗）一般是鼠抗体或兔抗体，没有酶标，相对应的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗体，用酶进行标记。也有用马大规模备抗体的。
TDS-ELISA是三抗体ELISA，第三级的抗体是将信号级联放大。
以上三种是比较常见的，还有其他一些试剂盒，可参考免疫学的内容。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
