Description
in vivoDNA RNAAdvanced Transfection Reagent can be injected intravenously or by local tissue injection in vivo. Further more, total injection volume is very small, dense tissue can be transfected by microinjection and the time of circulation in vivo is long. Both DNA, siRNA and co-transfection can becarried out.
General Considerations
1>DNA quality requirements
Concentration: 300ng/ul-2μg/ul;
Solution: dissolved in ddH2O or ultra-pure wate;
Endotoxin: removed
2>RNA quality requirements
Concentration: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM
General Protocol for in vivo Transfection
1>Complex preparation:Nucleic acid was directly mixed with transfection reagent according to 1:1 relationship. Thenuse a pipette to blow up 10-15 times to mix.After incubatingat room temperature for 10-15 minutes,complex would be prepared.During the procedure, no liquid residue was ensured on the wall of tube.
2>Intravenous injection or local tissue injection of prepared complex can be proceeded with a syringe or microinjection needle.
3>3 or 5 days afterinjection, efficiency of transfectionwould reach the peak, and expression of target gene could be detected then.
Important Guidelines
1>The ratio of DNA (μg) or 20 μM siRNA (μl) to transfection reagent (μl) should be 1:1.
2>The volume of siRNA used in above table is specific for siRNA of 20 μM. If the concentration of siRNA is 40 μM, the volume of siRNA in above table should be halved. If the concentration of siRNA is 80 μ M, the volume of siRNA in above table should be divided by 4, and so on.
3>When local tissue injection is performed, the amount of the complex should be 5-10 μl/cm2.
4>In co-transfection experiment, the total amount of nucleic acid in above table remains the same, the proportion of various nucleic acids could be adjusted according to experimental requirements, then nucleic acids can be mixed with transfection reagent sufficiently.
5>In the specific experimental operation, the dosage of nucleic acid and transfection reagent can be adjusted according to the "maximum injection volume" in the table above.
Order Information
Product | Catalog | Size |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV500025 | 0.25ml |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV500050 | 0.50 ml |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV500075 | 0.75ml |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV500150 | 1.50 ml |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV500500 | 5.00 ml |
in vivo DNA RNA Advanced Transfection Reagent | AV501000 | 10.00 ml |
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DAS-ELISA试剂盒中抗体有包被抗体和酶标抗体，这两种抗体是一种抗体，前者没有酶标，后者用酶进行了标记。
NCM-ELISA一般有一抗和二抗，这两种抗体不一样，前者（一抗）一般是鼠抗体或兔抗体，没有酶标，相对应的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗体，用酶进行标记。也有用马大规模备抗体的。
TDS-ELISA是三抗体ELISA，第三级的抗体是将信号级联放大。
以上三种是比较常见的，还有其他一些试剂盒，可参考免疫学的内容。
需要的仪器有：酶标仪、恒温箱、枪、枪头、烧杯、滤纸.当然有自动洗板机最好.
复习了很多文献在测定方法里面均提到了CV
例如：
Theintra-assaycoefficientofvariationfortheassaywas4-6%.
Theanalyticcoefficientofvariationwas10.2%
问题是：
我是否可以直接使用说明书里的CV值？
如果不可以，我该如何操作进行计算
首先要什么有什么的，你得好好考虑一下。
2、看生产地址
根本没有生产地址，我们知道做实验做产品需要很多的仪器、试剂、耗材，没有人相信一间简单的屋子可以生产各种样的试剂盒。
3、看产品包装
没有任何的生产地址、联系方式等信息，这种产品有问题了连个投诉的地方都没有。
4、看公司网站
有些打着国外原装旗号，整个公司网站为英文页面，实际注册IP地址在中国。如果写着国外的地址，让你国外的朋友实地去看一下！
5、做交叉验证
拿对方提供的几个种类的试剂盒，把里面的关键组份相互替换做做实验，如果交叉严重，只能说明是一种原料生产的试剂盒贴了不同的标签。
6、看价格
价格低得离谱，却打着进口大公司原料分装，核算成本，这种低得离谱的价格是连原料都买不起的。
1．取出试剂盒室温平衡30min，取出血样放至室温。
2．配标准品：取150uL标准品加入150uL标准品稀释液稀释，依次稀释5次。
3．加样：分别于各反应孔中加入标准品50uL，样品40UL，标准品做复孔，样品做3孔。
4．分别于样品孔中加入10UL抗体。
5．标准品和样品孔中分别加入50uL链酶亲和素-HRP，盖上封板膜,轻轻震荡混匀，37℃温育60min。
6．配洗涤液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7．洗涤：小心揭开封板膜，弃去液体，甩干，每孔加200uL洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。
8．显色：每孔先加入显色剂A 50uL，再加显色剂B 50uL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色6min。
9． 终止：每孔加入终止液50uL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。
10．测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。测定应在加终止液10min之内进行。
11．保存结果，收拾桌面。
12．分析处理数据
注意事项
1. 取出板条前恢复到室温后再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，其余不用试剂应盖好。
2. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
3．实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育时间一致。
4．洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
5．试剂盒内试剂请在保质期内使用，不同批号试剂不要混用。
6．1000pg/ml以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。大于1000pg/ml 的样品应以标准稀释缓冲液稀释后重做。在结果分析时，结合考虑相应的稀释度。
