Hemoglobin Antibody (Goat)
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For orders greater than 10 grams, please request a quote.
| Product Description | This antibody is obtained by immunization with purified human hemoglobin (Hb) and affinity purification with human Hb on agarose. The antibody could be utilized for detection andquantizationof the human hemoglobin using ELISA, WB gold colloid methods. | |||
| Species | Goat | |||
| Formulation | 5 mg/mL in PBS or lyophilized powder. | |||
| Immunogen | Human Hemoglobin whole protein. | |||
Purification | The antibody was affinity purified with pure human hemoglobin on agarose beads. | |||
Specificity | The antibody recognizes human hemoglobin. It may cross-react with hemoglobin of other mammalian species. | |||
| Applications | ELISA (0.1-0.5 µg/mL); | |||
| Scientific Description | Hemoglobinis theiron-containingoxygen-transportmetalloproteinin thered blood cells.Hemoglobin concentration measurement is among the most commonly performedblood tests, usually as part of acomplete blood count. Inmedicine,hemoglobinuriais a condition in which thehemoglobinis found in abnormally high concentrations in theurine. The condition is often associated withhemolytic anemia, in whichred blood cells(RBCs) are destroyed, thereby increasing levels of freeplasmahemoglobin. Excess hemoglobin is filtered by thekidneys, which excrete it into the urine, giving urine a purple color. | |||
| Storage & Stability | Product is stable for several weeks at 4°C. For extended storage, aliquot content and store product at -20°C. Avoid cycles of freezing and thawing. Expiration date is one year from date of shipping if stored properly. |
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抽血检测,一般用三代酶联合免疫法 酶联免疫法,简称ELISA。 它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。 步骤:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清(这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因,其实是误会)。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲,如果第一次检测为阳性的话,无论是哪个实验室,必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测,第二次的方法必须与第一次的不同,如还是阳性,将送确认实验室确认。有的医院很不负责,将初筛阳性的报告发出后就不管了,这是不对的。必须经过确认实验室确认后才可出阳性诊断。祝大家。PS,第一次检测为阳性的话,一定要去确认实验室再做一次,勇敢的去面对,也许结果就不一样了。 基本原理是:使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
BAS-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用,而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样,结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应,既起到了多级放大作用,又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色,达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。
BAS用于检测的基本方法可分为三大类。
第一类是标记亲和素连接生物化大分子反应体系,称BA法,或标记亲和素生物素法(LAB)。
第二类以亲和素两端分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素,称为桥联亲和素-生物素法(BRAB)。
第三类是将亲和素与酶标生物素共温形成亲和素-生物素-过氧化物酶复合物,再与生物素化的抗抗体接触时,将抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体,称为ABC法。这一方法可以将微量抗原的信号放大成千上万倍,以便于检测。 亲和层析是将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中,当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附,直接流出,从而与被分离的蛋白质分开,然后选用适当的洗脱液, 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。
生物素-亲和素系统可以与亲和层析的方法结合,大大提高纯化蛋白质的纯度,或者为已知配体寻找受体。步骤是首先将生物素共价结合到配体蛋白上,再将生物素化后的配体蛋白加入含有受体蛋白的混合物,然后将此混合物通过预先固定了亲和素的层析柱,这时配体受体复合物就通过生物素-亲和素系统停留在层析柱上,最后通过选择性洗脱获得此受体配体蛋白复合物或者仅有受体。这一方法被广泛运用于药物研发行业,当人们发现某种药物分子具有疗效但是又不清楚它具体作用于哪种蛋白质时,可以将其生物素化然后把靶蛋白从成千上万种蛋白质中“抓”出来。
生物素-亲和素系统还可以用相似的方法分离DNA.方法是在DNA探针的一端挂上生物素,然后用其获得目的DNA片段,再利用固定化的亲和素回收这些DNA。
传统的基因探针是由带放射性的磷酸碱基合成的,我们可以用被生物素标记的磷酸碱基合成基因探针,避免了实验过程中放射性物质可能造成的伤害。
Eli-spot分析是设计用于在单细胞悬液中计数分泌细胞因子的细胞数量的方法。这个方法的优点在于只需在体外进行很少的处理从而使细胞因子产生的分析尽可能接近于体内状况。这个技术用于测定在给予一定刺激的情况下细胞因子产生细胞的数目,以及在某种处理或病理条件下的细胞因子产生细胞的数量。
2主要原理
细胞刺激后,原位产生的细胞因子被一种特异的单抗捕获,在细胞溶解后,捕获的细胞因子与第二种生物素化的检测性抗体结合,后者进一步通过与连接碱性磷酸酶的链亲和素结合被识别。PVDF包被孔的板之后与BCIP/NBT底物作用,紫色的斑点提示单个细胞产生的细胞因子。
35×96孔试剂盒的内容物
▲捕获抗体(0.52ml),置于4℃。
▲生物素化检测抗体(冻干,重悬于0.55ml水中)。
▲抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶结合物,置于4℃。
▲牛血清白蛋白(1g),置于4℃。
▲撇去的干牛奶(1g),放于室温。
▲备用底物溶液(50ml),置于4℃。
▲96孔PVDF包被板。
▲96孔PVDF-包被板
▲细胞培养基
▲CO2孵箱
▲70%乙醇
▲Tween20
▲碱性磷酸盐缓冲液
5直接或间接Eli-spot
细胞可以在抗体包被孔中直接刺激(直接)或者首先在24孔板或细颈瓶中刺激,收获,然后种于包被孔中(间接)。
方法根据:1)被分析的细胞类型;2)预期的细胞密度。如果细胞因子产生细胞的数量很少,建议用直接法实验,但是如果细胞因子产生细胞的数量很多,最好用间接的方法。无论采用直接或间接的方法,所有刺激以后的步骤是相同的。
主要步骤:
1)96孔PVDF板首先以70%乙醇处理,然后以捕获抗体包被。
2)将细胞放入抗体包被过的含有抗原/丝裂原的微孔中,在间接法中细胞被预刺激。
3)细胞用倒置平板法去除,与生物素标记的抗体共育。
4)与结合于碱性磷酸盐的链霉亲和素反应。
5)BCIP/NTB斑点形成。
◆刺激步骤:
小鼠脾细胞在PMA和lonomycin刺激下产生IFN-γ。人的IFN-γ由PBMC在PMA和lonomycin的刺激下产生。
建议步骤:
小鼠1)分离脾细胞,ficoll。间期收获细胞。用PBS洗三次,去除ficoll。2)用培养基稀释细胞(RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清)含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10(4)—5×10(4)细胞到抗体包被的PVDF包被板,在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同,根据细胞因子产生细胞的密度,优化条件。
人用培养基稀释细胞(RPMI1640含2mML_glutamine,10%灭活的胎牛血清)含1ng/mlPMA和500ng/mlionomycin(Sigma),加2×10(4)—5×10(4)细胞到抗体包被的PVDF包被板,在孵箱中培养10—15小时。对于其它刺激物孵育时间可能不同,根据细胞因子产生细胞的密度,优化条件。
●试剂准备
●检测抗体用0.55ml蒸馏水溶解冻干抗体,轻轻混匀溶液并等到所有冻干抗体溶解。
●抗生物素蛋白链霉素-碱性磷酸酶用含1%BSA的PBS稀释(1/1000)
●碱性磷酸盐缓冲液(10×浓缩液)
1L溶液:80gNaCL;2gKH2PO4;14.4gNa2HPO42H2O;2gKCL,加蒸馏水至1升。检查PH在7.2-7.4之间,此溶液在用之前稀释为1×溶液。
●含2%脱脂干奶粉的PBS一块板溶0.2g干粉于10ml1×PBS。
●含1%BSA的PBS一块板溶0.2g干粉于20ml1×PBS。
●含0.1%Tween的PBS一块板溶100μlTween20于100ml1×PBS。
●70%乙醇一块板以3ml蒸馏水和7ml乙醇混匀。
★试剂保存
1)如果短时间内不用,溶解的检测抗体应分装和保存于—20℃,在这种条件下,试剂可稳定保存至少一年。
2)底物缓冲液保存于4℃。
3)链霉亲和素-碱性磷酸酶保存于4℃。
Eli-spot步骤
1PVDF包被板用100ul70%乙醇室温下处理10分钟。
2倒空孔并以100ulPBS洗3次。
3将100ul捕获抗体加到10mlPBS中,混合并分至每孔中100ul,盖上板盖,放至4℃过夜。
4倒空每孔,用100ulPBS洗一次。
5每孔加100ul含2%脱脂干牛奶的PBS,盖板,室温2小时。
6在洗涤槽上轻弹板子倒空液体,并在吸水纸上吸干。
7用PBS洗一次。
8分配每孔100ul细胞悬液(含合适的细胞数和合适的刺激物浓度),细胞可以在体外预刺激(间接Eli-spot)。盖上板,放细胞于37℃CO2孵箱,合适的时间15-20小时。(在此期间不要摇动或平移平板。)
9在洗涤槽上轻弹板子倒空液体,并在吸水纸上吸干。
10每孔加100ul含0.1%Tween20的PBS,4℃放置10分钟。
11用含0.1%Tween20的PBS洗板三次。
12每一块板,稀释100ul检测抗体到10ml含1%BSA的PBS中,每孔加100ul,封闭扳子放于37℃1小时30分钟。
13倒空扳子并用含0.1%Tween20的PBS洗三次。
14每一块板,稀释10ul链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物到10ml含1%BSA的PBS中,每孔加100ul,封闭扳子放于37℃1小时。
15倒空,用含0.1%Tween20的PBS洗三遍,反复用吸水纸吸以去尽所有残存的液体。
16每孔加100ul备用BCIP/NBT溶液。
17让反应在室温进行5-20分钟。肉眼可见小斑点形成。
18用蒸馏水洗三次。
19干燥每孔。计数斑点。注意斑点在4℃过夜后可能会变得明显,放置扳子于室温,避免直接光照。
yyj5028
生物素和亲和素的结合部位是咪唑酮环
已修改~
下面开始更新2016的

